油红O脂质染色试剂盒--脂质染色步骤及检测原理说明

细胞脂质通常存在于细胞及其细胞器的膜中。在那些储存脂质用于能量产生或作为更复杂结构的来源的细胞中，脂质通常以滴状形式出现，主要由甘油三酯组成，尽管其他中性脂质也可能存在。脂肪细胞分化为成熟细胞涉及脂滴的显著积累。有一些脂质储存疾病（如高雪氏病、尼曼-皮克病、法布里病等），其中过量脂质的积累可能导致严重的病理变化。油红O是一种脂溶性偶氮染料，它优先将中性脂质染成红色，因此非常适合用于观察中性脂质的积累。AkrivisBio油红O脂质染色试剂盒还包括苏木精用于将细胞核染成蓝色，是一种简单、经济的方法，可在显微镜下定性观察细胞培养中细胞的脂质积累。该试剂盒提供了足够的材料来染色两个培养板（6孔、12孔、24孔或96孔）或五个100毫米培养皿。

艾美捷油红O脂质染色试剂盒：

货号：COS-0101

规格：用于染色两个培养板（6孔、12孔、24孔或96孔）或五个100毫米培养皿  

样本类型：培养细胞  

适用范围：所有物种  

检测方法：光学显微镜  

检测类型：定性  

应用：在显微镜下观察培养细胞中的脂质积累  

储存条件：室温  

运输温度：室温  

有效期：自发货日期起一年  

原理：  

1. 非常疏水的染料优先在细胞培养中与中性脂质一起积累。  

2. 经过足够时间后，脂质积累会呈现为深红色物体。  

油红O脂质染色试剂盒试剂盒组成：  

PBS：50 ml（NM COS-0101A）  

10%甲醛：24 ml（NM Blue Dot COS-0101B）  

油红O：60 mg（NM COS-0101C）  

苏木精：24 ml（琥珀色，COS-0101D）  

0.22 um注射器过滤器：1个（COS-0101E）  

10 ml注射器：1个（COS-0101F）  

用户自备材料：  

光学显微镜  

100%异丙醇  

储存条件和操作：  

将试剂盒储存于室温。  

PBS、10%甲醛和苏木精：按供应状态即可使用。  

油红O：向装有油红O粉末的瓶中加入20 ml 100%异丙醇，盖紧瓶盖并充分混合。让溶液静置20分钟以完成溶解。如果盖紧瓶盖，溶液可保存一年以上。  

制备油红O染色液：将6.7 ml油红O溶液转移到一个15 ml的试管中，加入4.4 ml去离子水，充分混合，静置10分钟。使用前15 30分钟用注射器和过滤器过滤溶液。该溶液足够用于一个培养板，稳定时间约为2小时。  

脂质染色步骤：  

对于所有添加物，每个孔的使用量如下：  

培养板：96孔 48孔 24孔 12孔 6孔 100 mm培养皿  

100 ul 200 ul 400 ul 800 ul 1.6 ml 5.5 ml  

A. 洗涤：移去细胞培养基，用PBS轻轻洗涤2次。  

B. 固定：轻轻向每个孔的侧面加入甲醛。处理完所有孔后，轻轻旋转培养板。孵育30 60分钟。  

C. 染色：  

1. 移去甲醛，用去离子水轻轻洗涤细胞2次。  

2. 向每个孔中加入60%异丙醇，孵育5分钟。  

3. 移去异丙醇，加入油红O工作液（完全覆盖细胞）。轻轻旋转培养板，孵育10 20分钟。  

4. 移去油红O溶液，根据需要用去离子水洗涤2 5次，直至多余染料不再明显。丢弃未使用的染料。  

5. 加入苏木精，孵育1分钟。移去苏木精，根据需要用去离子水洗涤2 5次。  

D. 观察：在显微镜下观察时，始终用去离子水覆盖细胞。脂滴呈红色，细胞核呈蓝色。  

注意：虽然油红O染色并非定量检测，但可以获得脂质含量的半定量测量：  

在苏木精染色并用去离子水洗涤后（如上一步），用60%异丙醇洗涤3次，每次5分钟，轻轻摇动。  

用100%异丙醇（表中所示量的一半）提取油红O，轻轻摇动5分钟。此程序对于小于24孔板的孔不太有用，因为较小的孔会给出较低的信号，并且处理起来效率不高。可以在492 nm处读取吸光度。  

图：油红O染色细胞  

来源：Nguyen等人，2021年，《发育细胞》56卷，1437 1451页， May 17, 2021