BPS Bioscience GCGR/CRE 荧光素酶报告基因 HEK293 细胞系解决方案

GCGR/CRE荧光素酶报告基因HEK293细胞系是一种HEK293细胞系，表达由cAMP反应元件（CRE）控制的萤火虫荧光素酶，以及人类GCGR（胰高血糖素受体；NM_000160.5）。可以通过测量荧光素酶活性来监测这些细胞中GCGR的激活。该细胞系已使用胰高血糖素和Retatrutide激动剂进行了功能性验证。

图1. GCGR/CRE荧光素酶报告基因HEK293细胞系用胰高血糖素处理时的作用机制示例。

胰高血糖素与GCGR结合，触发腺苷酸环化酶的激活，导致细胞内cAMP增加。蛋白激酶A被激活，允许CRE启动子的激活和荧光素酶的产生。因此，荧光素酶活性与GCGR与其激动剂的结合成正比。

背景

胰高血糖素受体（GCGR）属于B1类G蛋白偶联受体（GPCR家族）。与GLP-1R（胰高血糖素样肽1受体）和GIPR（胃抑制多肽受体）一起，它是调节葡萄糖稳态的关键受体之一。GCGR的配体胰高血糖素通过GCGR和GLP-1R在胰岛β细胞中增加胰岛素分泌，尽管GLP-1R是主要的胰岛素促进受体。此外，已经显示胰高血糖素增强啮齿动物和人类的肝脏脂质代谢并减少食物摄入。最近，三激素受体激动剂Retatrutide和几种GLP1R/GCGR双重激动剂的临床结果令人鼓舞，表明GCGR可能是治疗2型糖尿病和肥胖症的一个有前景的共同刺激靶标。

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应用

在细胞模型中筛选人类GCGR的激动剂

细胞解冻

1. 从液氮储存中取出一个细胞小瓶。在准备解冻前保持在干冰上。

2. 准备解冻时，在37°C水浴中摇晃装有冷冻细胞的小瓶大约60秒。一旦细胞解冻（可能比60秒稍快或稍慢），迅速将小瓶的全部内容转移到一个空的50毫升锥形管中。

注意：在37°C的水浴中放置细胞过久会导致活性迅速丧失。

3. 使用10毫升的血清学移液管，缓慢地向含有细胞的锥形管中加入10毫升预温的解冻培养基1。解冻培养基1应滴加同时轻轻摇晃锥形管，以实现温和混合并避免渗透冲击。

4. 立即以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基并用5毫升预温的解冻培养基1重悬细胞。

5. 将重悬的细胞转移到T25培养瓶中，并在37°C和5% CO2培养箱中培养。

6. 培养24小时后，检查细胞附着和活性。更换培养基为新鲜的解冻培养基1，并继续在37°C和5% CO2培养箱中培养，直到细胞准备好分裂。

7. 细胞应在完全融合前进行传代。在第一次传代和后续传代中，使用生长培养基1G。

细胞传代

1. 抽吸培养基，用无Ca2+/Mg2+的磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗细胞，并用0.05%胰酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基1A并转移到试管中。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基并用生长培养基1G重悬细胞。

4. 按照推荐的1:6至1:8的传代比例，每周一次或两次将细胞种植到新的培养容器中。

细胞冷冻

1. 抽吸培养基，用无Ca2+/Mg2+的PBS冲洗细胞，并用0.05%胰酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基1G并计数细胞。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基并在4°C的细胞冷冻培养基（BPS Bioscience #79796）中重悬细胞，细胞浓度约为2 x 10^6个细胞/毫升。

4. 将1毫升的细胞悬浮液分装到每个冷冻小瓶中。将小瓶放入保温容器中缓慢冷却，并在-80°C下过夜保存。

5. 次日将小瓶转移到液氮中长期保存。

注意：建议在早期传代时扩增细胞并至少冷冻10个小瓶以备将来使用。

图2. GCGR/CRE荧光素酶报告基因HEK293细胞系对GCGR激动剂胰高血糖素和Retatrutide的剂量反应曲线。

细胞用逐渐增加浓度的胰高血糖素（上图）和Retatrutide（下图）处理。使用ONE-Step?荧光素酶检测系统测量发光。

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Products Catalog # Size

GLP-1R/CRE Luciferase Reporter HEK293 Cell Line 78176 2 vials

GIPR/CRE Luciferase Reporter HEK293 Cell Line 78589 2 vials

CGRPR/CRE Luciferase Reporter HEK293 Cell Line 78325 2 vials

GPRC5D CHO Cell Line 78337 2 vials

GPRC5D HEK293 Cell Line 78345 2 vials

GPRC5D (Cynomolgus) CHO Cell Line 78338 2 vials

GPRC5D (Cynomolgus) HEK293 Cell Line 78346 2 vials

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