BPS Bioscience GIPR/CRE 荧光素酶报告基因 HEK293 细胞系：功能性验证与应用

GIPR/CRE Luciferase Reporter HEK293 Cell Line 是一种经过工程改造的 HEK293 细胞系，表达由 cAMP 反应元件（CRE）控制的萤火虫荧光素酶，以及人类 GIPR（胃抑制多肽受体；NM_000164.4）。可以通过测量荧光素酶活性来监测这些细胞中 GIPR 的激活。GIPR/CRE Luciferase Reporter HEK293 Cell Line 的功能性已在使用胃抑制多肽（GIP）、Tirzepatide 和 Retatrutide 等激动剂的剂量反应实验中得到验证。这些激动剂以剂量依赖性方式诱导荧光素酶活性，如图 1 所示。

图 1. GIPR/CRE Luciferase Reporter HEK293 Cell Line 中作用机制的示意图。

背景

胃抑制多肽受体（GIPR），也称为葡萄糖依赖性胰岛素促进多肽受体，属于 B1 类 G 蛋白偶联受体（GPCR）家族。GIPR 主要存在于胰腺的 β-细胞中，作为胃抑制多肽（GIP）激素的受体。作为肠促胰岛素激素之一，GIP 通过刺激胰腺 β-细胞释放胰岛素来调节葡萄糖代谢。由于 GIPR/GLP-1R 异源二聚体化调节 GLP-1R 信号传导，同时结合 GIPR 和 GLP-1R 的双重激动剂已显示出治疗 II 型糖尿病（T2DM）和肥胖症的临床疗效。

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应用（用途）

在细胞模型中筛选和表征人类 GIPR 的激动剂。

细胞解冻

1. 在 37°C 水浴中摇晃装有冷冻细胞的小瓶大约 60 秒。细胞一旦解冻（可能比 60 秒稍快或稍慢），迅速将小瓶的全部内容转移到含有 10 ml 预温的解冻培养基 1 的试管中。

注意：在 37°C 的水浴中放置细胞过久会导致活性迅速丧失。

2. 立即以 300 x g 的速度离心细胞 5 分钟，去除培养基并用 5 ml 预温的解冻培养基 1 重悬细胞。

3. 将重悬的细胞转移到 T25 培养瓶中，并在 37°C 和 5% CO2 培养箱中培养。

4. 培养 24 小时后，检查细胞附着和活性。更换培养基为新鲜的解冻培养基 1，并继续在 37°C 和 5% CO2 培养箱中培养，直到细胞准备好分裂。

5. 细胞应在完全融合前进行传代。在第一次传代和后续传代中，使用生长培养基 1G。

细胞传代

1. 抽吸培养基，用无 Ca2+/Mg2+ 的磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗细胞，并用 0.05% 胰酶/EDTA 从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基 1G 并转移到试管中。

3. 以 300 x g 的速度离心细胞 5 分钟，去除培养基并用生长培养基 1G 重悬细胞。

4. 按照推荐的 1:6 至 1:8 的传代比例，每周或每两周将细胞种植到新的培养容器中。

细胞冷冻

1. 抽吸培养基，用无 Ca2+/Mg2+ 的 PBS 冲洗细胞，并用 0.05% 胰酶/EDTA 从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基 1G 并计数细胞。

3. 以 300 x g 的速度离心细胞 5 分钟，去除培养基并在 4°C 的细胞冷冻培养基（BPS Bioscience #79796）中重悬细胞，细胞浓度约为 2 x 10^6 个细胞/ml。

4. 将 1 ml 的细胞悬浮液分装到每个冷冻小瓶中。将小瓶放入保温容器中缓慢冷却，并在 -80°C 下过夜保存。

5. 次日将小瓶转移到液氮中长期保存。

注意：建议在早期传代时扩增细胞并至少冷冻 10 个小瓶以备将来使用。

图 . GIPR/CRE Luciferase Reporter HEK293 Cell Line 中 GIPR 的细胞表面表达。

GIPR/CRE Luciferase Reporter HEK293 细胞（绿色）或对照 CRE Luciferase Reporter HEK293 细胞（蓝色）用人类 GIPR PE 偶联抗体（R&D Systems #FAB8210P）染色，并通过流式细胞仪分析。Y 轴代表细胞数量百分比。X 轴表示 PE 的强度。

BPS Bioscience是一家通过ISO 9001:2015认证的生命科学领域的供应商，公司一直致力于开发药物研发领域的重组蛋白酶、蛋白酶活性/抑制剂筛选试剂盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年创立，从创立至今一直致力于提供药物研发领域的创新解决方案，以推动新的药物发现。公司主要关注的领域包括免疫疗法、表观遗传学、新型冠状病毒、CRISPR、细胞信号转导等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、组蛋白去甲基化酶、组蛋白甲基化转移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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