BPS Bioscience CSL 报告基因 - HEK293 细胞系，Notch信号激活监测

Notch信号通路控制脊椎动物和无脊椎动物组织中的细胞命运决定。

Notch信号通过跨膜配体与邻近细胞上的Notch跨膜受体（NOTCH1/NOTCH2/NOTCH3/NOTCH4）结合而被触发。这导致Notch受体的蛋白水解切割，释放出恒定活跃的Notch受体内细胞域（NICD）。NICD转移到细胞核，并与转录因子CSL（CBF1/RBPJκ/无毛抑制因子/Lag-1）和共激活因子Mastermind结合，激活Notch响应基因的转录。

描述

Notch CSL报告基因-HEK293细胞系包含在Notch响应元件（CSL响应元件）控制下的萤火虫荧光素酶基因，这些元件稳定地整合入HEK293细胞中。将Notch表达载体转染到这一细胞系，并激活Notch通路，将导致荧光素酶报告基因的表达。这一细胞系已通过Notch1DelE表达载体验证，该载体由γ-分泌酶恒定处理，导致NICD的释放和荧光素酶的表达。

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应用

? 监测Notch信号通路活性。

? 筛选Notch信号通路的抑制剂。

? 测试合成Notch受体（synNotch）或其他条件性激活CSL启动子的遗传构建体。

所需但未提供的材料

? 培养基：解冻培养基1（BPS Bioscience #60187）

? 生长培养基1B（BPS Bioscience #79531）

? Lipofectamine 2000（Invitrogen #11668027）或其他转染试剂

? DAPT（Selleckchem #S2215）：Notch通路抑制剂（γ-分泌酶抑制剂）。在DMSO中制备10 mM的库存溶液。

? 96孔组织培养板或96孔组织培养处理的白色透明底部检测板（Corning #3610）

? ONE-Step?荧光素酶检测系统（BPS Bioscience #60690）

? 荧光素酶测定仪

图1.Notch CSL报告基因-HEK293细胞对Notch通路抑制剂的反应。

A. DAPT阻断Notch报告基因活性。转染了Notch1DelE、Notch2DelE、Notch3DelE、Notch4DelE或空载体的CSL-HEK293细胞用10 ?M DAPT或DMSO对照处理。DAPT抑制了Notch的γ-分泌酶处理，导致荧光素酶表达减少。

文献参考：

Lu, F.M., et al. (1996) Constitutively active human Notch1 binds to the transcription factor CBF1 and stimulates transcription through a promoter containing a CBF1-responsive element. Proc.

Natl. Acad. Sci. USA 93(11): 5663-5667.

Kanungo, J., et al (2008) The Notch signaling inhibitor DAPT down-regulates cdk5 activity and modulates the distribution of neuronal cytoskeletal proteins. J. Neurochem. 106: 2236-2248.

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