BPS Bioscience CRISPRa (SAM) HEK293 细胞系--快速生成CRISPR激活的HEK293细胞池或细胞系

这一细胞系已被工程化，用于CRISPR协同激活介质（SAM）系统，以诱导任何感兴趣基因的转录激活和表达。细胞稳定表达一种突变的dCas9（化脓性链球菌CRISPR相关蛋白9），缺乏任何内切核酸酶活性，与转录激活因子VP64融合。稳定的dCas9-VP64表达通过Blasticidin抗性维持。细胞还稳定表达与MS2标签融合的P65（转录因子p65，或核因子NF-κB p65）和HSF1（热休克因子1），通过Hygromycin抗性维持。当这些细胞被转染以MS2标签的sgRNA，靶向感兴趣基因的启动子区域时，dCas9-VP64和MS2-P65-HSF1被招募到基因组DNA并开始转录，诱导所需基因的表达。

作为BPS Bioscience在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BPS Bioscience热销产品CRISPRa (SAM) HEK293 细胞系。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

应用

1. 快速生成CRISPR激活的HEK293细胞池或细胞系

2. 在HEK293细胞中实施sgRNA CRISPRa筛选

推荐培养条件

1. 建议在37?C水浴中快速解冻液氮中的冷冻细胞，然后将小瓶的全部内容转移到含有10毫升解冻培养基6（不含Hygromycin或Blasticidin）的试管中。

2. 然后离心细胞，去除上清液，并用5毫升预温的解冻培养基6（不含Hygromycin或Blasticidin）重悬细胞。

3. 将重悬的细胞转移到T25培养瓶中，并在37?C和5% CO2培养箱中培养。

4. 培养24小时后，再加入额外的3-4毫升解冻培养基6（不含Hygromycin或Blasticidin）。

5. 在第一次传代时，切换到含有Hygromycin和Blasticidin的生长培养基6D。

传代：

1. 当细胞达到90%融合时，去除生长培养基，并用不含镁或钙的PBS冲洗两次。

2. 向细胞中加入2-3毫升0.25%胰酶/EDTA，并在37°C下培养2-3分钟。

3. 通过光学显微镜确认细胞脱落后，加入10毫升预温的生长培养基6D，并轻轻上下吹打以分散细胞团。

4. 将细胞转移到15毫升锥形管中，并以200 x g的速度离心5分钟。

5. 去除培养基，并用10毫升预温的生长培养基6D重悬细胞。

6. 将2毫升细胞悬浮液分装到新的T75培养瓶中，其中含有预温的18毫升生长培养基6D（推荐传代比例为1:2至1:10）。

7. 在湿度控制的37°C培养箱中，含有5% CO2的条件下培养细胞。

冷冻保存：

1. 当细胞达到90%融合时，如上所述使用胰酶从培养板中移除细胞，离心细胞并从沉淀中去除培养基。

2. 在含有10% DMSO的FBS中的冷冻培养基中重悬细胞。

3. 使用减速冷冻盒（每分钟下降-0.5°C至-1°C）将细胞冷冻至-80°C，然后将细胞转移到液氮中长期保存。

已证明细胞至少稳定15代；BPS建议准备冷冻库存，以便细胞使用不超过20代。

图1. CRISPRa（SAM）HEK293细胞中PD-1的诱导。

CRISPRa（SAM）HEK293细胞被sgRNA-MS2慢病毒转导，靶向PD-1（BPS Bioscience，#78190）以诱导PD-1表达。在电穿孔后72小时（无选择）用PE标记的抗PD-1抗体（BioLegend，#637309）染色，并用流式细胞仪分析。亲本CRISPRa（SAM）HEK293细胞以蓝色显示，转染的CRISPRa（SAM）HEK293细胞以绿色显示。

BPS Bioscience是一家通过ISO 9001:2015认证的生命科学领域的供应商，公司一直致力于开发药物研发领域的重组蛋白酶、蛋白酶活性/抑制剂筛选试剂盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年创立，从创立至今一直致力于提供药物研发领域的创新解决方案，以推动新的药物发现。公司主要关注的领域包括免疫疗法、表观遗传学、新型冠状病毒、CRISPR、细胞信号转导等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、组蛋白去甲基化酶、组蛋白甲基化转移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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