BPS Bioscience CGRPR/CRE 荧光素酶报告基因 HEK293 细胞系，CGRP信号传导研究平台

重组HEK293细胞系稳定表达全长人类降钙素受体样受体（CALCRL/CRLR/CLR；登录号：NM_005795）和由多聚化的cAMP反应元件（CRE）控制的萤火虫荧光素酶。这一细胞系可用于通过荧光素酶报告基因活性作为读出，测量CGRP受体激动剂和拮抗剂的EC50和IC50。

背景

降钙素基因相关肽（CGRP）受体是一种由三个组分构成的G蛋白偶联受体：降钙素受体样受体（CALCRL）、受体活性调节蛋白（RAMP1）和CGRP受体组分蛋白（CRCP）。RAMP1对于降钙素样受体向质膜的转运和与CGRP激动剂的偶联是必需的。CRCP参与CGRP受体与G蛋白之间的关联。在配体结合后，复合物与G蛋白相互作用，Gαs亚基从复合物中解离并激活腺苷酸环化酶，产生cAMP。细胞内cAMP浓度的升高刺激cAMP依赖的信号通路，最终导致转录因子cAMP反应元件结合蛋白（CREB）结合到CRE启动子并诱导基因表达。

图1：CGRP的作用机制。

临床前证据表明，在偏头痛期间，三叉神经节中激活的感觉神经元在其位于脑膜内的投射神经末梢释放CGRP。释放的CGRP随后结合并激活CGRP受体，引起血管扩张和血浆外渗。进一步的证据来自观察到静脉注射α-CGRP会在易感个体中引起头痛。最近在理解CGRP在偏头痛中的作用方面取得的突破，促进了一类新的CGRP拮抗剂生物制剂的开发，这些生物制剂有望比传统药物治疗有显著改善。

作为BPS Bioscience在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BPS Bioscience热销产品CGRPR/CRE 荧光素酶报告基因 HEK293 细胞系。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

应用

? 在免疫疗法研究和药物发现中筛选CGRP受体的激活剂或抑制剂。

? 筛选抗CGRP抗体。

细胞培养协议

注意：HEK293细胞源自人类材料，因此建议采取适当的安全预防措施。

细胞解冻

1. 从液氮储存中取出一个细胞小瓶。在准备解冻前保持在干冰上。

2. 准备解冻时，在37°C水浴中摇晃装有冷冻细胞的小瓶大约60秒。一旦细胞解冻（可能比60秒稍快或稍慢），迅速将小瓶的全部内容转移到一个空的50毫升锥形管中。

注意：在37°C的水浴中放置细胞过久会导致活性迅速丧失。

3. 使用10毫升的血清学移液管，缓慢地向含有细胞的锥形管中加入10毫升预温的解冻培养基1。解冻培养基1应滴加同时轻轻摇晃锥形管，以实现温和混合并避免渗透冲击。

4. 立即以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基并用5毫升预温的解冻培养基1重悬细胞。

5. 将重悬的细胞转移到T25或T75培养瓶中，并在37°C和5% CO2培养箱中培养。

6. 培养24小时后，检查细胞附着和活性。更换培养基为新鲜的解冻培养基1，并继续在37°C和5% CO2培养箱中培养，直到细胞准备好分裂。

7. 细胞应在完全融合前进行传代。在第一次传代和后续传代中，使用生长培养基1G。

细胞传代

1. 抽吸培养基，用无Ca2+/Mg2+的磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗细胞，并用0.05%胰酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基1G并转移到试管中。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基并用生长培养基1G重悬细胞。

4. 按照推荐的1:10至1:20的传代比例，每周或每两周将细胞种植到新的培养容器中。

细胞冷冻

1. 抽吸培养基，用无Ca2+/Mg2+的PBS冲洗细胞，并用0.05%胰酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基1G并计数细胞。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基并在4°C的细胞冷冻培养基（BPS Bioscience #79796）中重悬细胞，细胞浓度约为2 x 10^6个细胞/毫升。

4. 将1毫升的细胞悬浮液分装到每个冷冻小瓶中。将小瓶放入保温容器中缓慢冷却，并在-80°C下过夜保存。

5. 次日将小瓶转移到液氮中长期保存。

注意：建议在早期传代时扩增细胞并至少冷冻10个小瓶以备将来使用。

图2：CGRPR/CRE荧光素酶报告基因HEK293细胞系中人类CALCRL的细胞表面表达。

CGRPR/CRE荧光素酶报告基因HEK293细胞或CRE荧光素酶报告基因HEK293亲本细胞用一级抗CALCRL抗体（Aviva #APR42260）和PE标记的驴抗兔二级抗体（Biolegend #406421）染色，并通过流式细胞仪分析。Y轴代表细胞数量百分比。X轴表示PE的强度。

BPS Bioscience是一家通过ISO 9001:2015认证的生命科学领域的供应商，公司一直致力于开发药物研发领域的重组蛋白酶、蛋白酶活性/抑制剂筛选试剂盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年创立，从创立至今一直致力于提供药物研发领域的创新解决方案，以推动新的药物发现。公司主要关注的领域包括免疫疗法、表观遗传学、新型冠状病毒、CRISPR、细胞信号转导等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、组蛋白去甲基化酶、组蛋白甲基化转移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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