BPS Bioscience TNFR2 HEK293 细胞系：筛选和表征TNFR2抗体

描述

重组HEK293细胞系，稳定表达人类TNFR2基因（TNFRSF1B或CD120b，NM_001066.3），受CMV启动子控制。

背景

肿瘤坏死因子受体2（TNFR2，也称为TNFRSF1B或CD120b）是TNF蛋白超家族的一种跨膜受体，能够结合多效性的促炎细胞因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）。TNFR2可以在几种T细胞亚群中找到，如调节性CD8+ T细胞（Tregs）和CD4+肿瘤浸润性T细胞、髓系细胞和某些癌症类型，它涉及自身免疫疾病、移植物抗宿主病和癌症。TNFR2已成为癌症免疫疗法的一个有吸引力的靶点，其作为癌基因和免疫调节因子的不同功能正在被探索。TNFR2还表现出神经保护特性，并促进组织再生，使其成为治疗阿尔茨海默病的有前景的潜在治疗靶点。

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应用

? 筛选和表征TNFR2抗体。

? 在HEK293细胞中研究TNFR2信号传导。

细胞解冻

1. 在37°C水浴中摇晃冷冻细胞瓶大约60秒。一旦细胞解冻（可能比60秒稍快或稍慢），迅速将瓶中全部内容物转移到含有10毫升预温的解冻培养基1（不含普鲁霉素）的试管中。在37°C水浴中放置过久会导致细胞活性迅速丧失。

2. 立即以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基，并在5毫升预温的解冻培养基1（不含普鲁霉素）中重悬细胞。

3. 将重悬的细胞转移到T25或T75培养瓶中，并在37°C的5% CO2培养箱中培养。

4. 培养24小时后，检查细胞附着和活性。更换为新鲜的解冻培养基1（不含普鲁霉素），并在37°C的5% CO2培养箱中继续培养，直到细胞准备好传代。

5. 细胞应在完全融合前传代。对于第一次传代及后续传代，使用生长培养基1N（含普鲁霉素）。

细胞传代

1. 抽吸培养基，用磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗细胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基1N并转移到试管中。以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基，并在生长培养基1N（含普鲁霉素）中重悬细胞。按照推荐的次培养比例范围1:8至1:10，每周一次或两次接种到新的培养容器中。

细胞冷冻

1. 抽吸培养基，用磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗细胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基1N并计数细胞。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基，并在4°C的冷冻培养基（BPS Bioscience #79796）中重悬细胞至约2 x 10^6细胞/毫升。

4. 将1毫升的细胞悬浮液分装到每个冷冻小瓶中。将小瓶放置在保温容器中缓慢冷却，并在-80°C下过夜保存。

5. 次日将小瓶转移到液氮中进行长期储存。

数据展示：

图1：TNFR2 HEK293细胞系中TNFR2的表达。

TNFR2 HEK293细胞（绿色）或对照亲本HEK293细胞（蓝色）用PE偶联的抗TNFR2抗体（Biolegend #358404）染色，并通过流式细胞仪分析。Y轴是细胞数量百分比。X轴是PE的强度。

文献参考：

1. Chen X, et al. (2017). Science Signaling, 10(462): 2328

2. Chopra M, et al. (2016) Exogenous TNFR2 activation protects from acute GvHD via host T reg cell

expansion. Journal of Experimental Medicine 213: 1881-1900

3. Medler J, et al. (2022) Tumor Necrosis Factor Receptor 2 (TNFR2): An Emerging Target in Cancer Therapy.

Cancers 14(11): 2603

4. Vanamee ?. and Faustman D. (2017). TNFR2: A Novel Target for Cancer Immunotherapy. Trends in

Molecular Medicine, 23(11): 1037-1046

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