描述
重组HEK293细胞系,稳定表达人类TNFR2基因(TNFRSF1B或CD120b,NM_001066.3),受CMV启动子控制。
背景
肿瘤坏死因子受体2(TNFR2,也称为TNFRSF1B或CD120b)是TNF蛋白超家族的一种跨膜受体,能够结合多效性的促炎细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。TNFR2可以在几种T细胞亚群中找到,如调节性CD8+ T细胞(Tregs)和CD4+肿瘤浸润性T细胞、髓系细胞和某些癌症类型,它涉及自身免疫疾病、移植物抗宿主病和癌症。TNFR2已成为癌症免疫疗法的一个有吸引力的靶点,其作为癌基因和免疫调节因子的不同功能正在被探索。TNFR2还表现出神经保护特性,并促进组织再生,使其成为治疗阿尔茨海默病的有前景的潜在治疗靶点。
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产品名称 | 货号 | 详情 |
TNFR2 HEK293 细胞系 | BPS-78828 | 查看 |
应用
? 筛选和表征TNFR2抗体。
? 在HEK293细胞中研究TNFR2信号传导。
细胞解冻
1. 在37°C水浴中摇晃冷冻细胞瓶大约60秒。一旦细胞解冻(可能比60秒稍快或稍慢),迅速将瓶中全部内容物转移到含有10毫升预温的解冻培养基1(不含普鲁霉素)的试管中。在37°C水浴中放置过久会导致细胞活性迅速丧失。
2. 立即以300 x g的速度离心细胞5分钟,去除培养基,并在5毫升预温的解冻培养基1(不含普鲁霉素)中重悬细胞。
3. 将重悬的细胞转移到T25或T75培养瓶中,并在37°C的5% CO2培养箱中培养。
4. 培养24小时后,检查细胞附着和活性。更换为新鲜的解冻培养基1(不含普鲁霉素),并在37°C的5% CO2培养箱中继续培养,直到细胞准备好传代。
5. 细胞应在完全融合前传代。对于第一次传代及后续传代,使用生长培养基1N(含普鲁霉素)。
细胞传代
1. 抽吸培养基,用磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗细胞,并用0.05%胰蛋白酶/EDTA从培养容器中分离细胞。
2. 一旦细胞分离,加入生长培养基1N并转移到试管中。以300 x g的速度离心细胞5分钟,去除培养基,并在生长培养基1N(含普鲁霉素)中重悬细胞。按照推荐的次培养比例范围1:8至1:10,每周一次或两次接种到新的培养容器中。
细胞冷冻
1. 抽吸培养基,用磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗细胞,并用0.05%胰蛋白酶/EDTA从培养容器中分离细胞。
2. 一旦细胞分离,加入生长培养基1N并计数细胞。
3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟,去除培养基,并在4°C的冷冻培养基(BPS Bioscience #79796)中重悬细胞至约2 x 10^6细胞/毫升。
4. 将1毫升的细胞悬浮液分装到每个冷冻小瓶中。将小瓶放置在保温容器中缓慢冷却,并在-80°C下过夜保存。
5. 次日将小瓶转移到液氮中进行长期储存。
数据展示:
图1:TNFR2 HEK293细胞系中TNFR2的表达。
TNFR2 HEK293细胞(绿色)或对照亲本HEK293细胞(蓝色)用PE偶联的抗TNFR2抗体(Biolegend #358404)染色,并通过流式细胞仪分析。Y轴是细胞数量百分比。X轴是PE的强度。
文献参考:
1. Chen X, et al. (2017). Science Signaling, 10(462): 2328
2. Chopra M, et al. (2016) Exogenous TNFR2 activation protects from acute GvHD via host T reg cell
expansion. Journal of Experimental Medicine 213: 1881-1900
3. Medler J, et al. (2022) Tumor Necrosis Factor Receptor 2 (TNFR2): An Emerging Target in Cancer Therapy.
Cancers 14(11): 2603
4. Vanamee ?. and Faustman D. (2017). TNFR2: A Novel Target for Cancer Immunotherapy. Trends in
Molecular Medicine, 23(11): 1037-1046
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