BPS Bioscience TGFβ/Activin A-响应荧光素酶报告基因 HEK293 细胞系，多功能研究

TGFβ/Activin A响应型荧光素酶报告基因HEK293细胞系是一种表达萤火虫荧光素酶报告基因的HEK293细胞系，该报告基因受SMAD响应元件（SMAD结合元件，SBE）的控制。该细胞系监测TGFβ（转化生长因子β）/SMAD信号通路的活性。

该细胞系已通过人类TGFβ1激活以及对TGFβ1超家族其他细胞因子如Activin A、GDF-8/Myostatin和GDF-11/BMP-11的响应进行了验证。人类TGFβ1和Activin A诱导的荧光素酶活性可被SB525334降低，SB525334是TGFβ1受体的抑制剂。Activin A、GDF-8/Myostatin和GDF-11/BMP-11诱导的荧光素酶活性可被Bimagrumab降低，Bimagrumab是ActRII的抗体。Activin A诱导的荧光素酶活性也可被Activin Blocker降低，Activin Blocker是ActRIIA-Fc融合蛋白，以及抗TGFβ抗体。

背景

TGFβ信号通路参与了多种细胞过程，如生长和分化、细胞周期停滞和免疫调节。TGFβ信号与心脏病、癌症、阿尔茨海默病等疾病有关。TGFβ蛋白结合到细胞表面受体，启动一个信号级联反应，导致信号蛋白SMAD2（母亲反对十指发育同源物2）和SMAD3的磷酸化和激活，然后与SMAD4形成复合物。SMAD复合物被转移到细胞核，并结合到目标基因启动子中的SMAD结合元件（SBE），导致TGFβ/SMAD响应基因的转录和表达。理解和调控这一通路可以为癌症治疗的方法开发提供重要线索。

作为BPS Bioscience在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BPS Bioscience热销产品TGFβ/Activin A-响应荧光素酶报告基因 HEK293 细胞系。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

应用

? 监测TGFβ信号通路的激活。

? 筛选调节TGFβ/SMAD信号通路的化合物。

细胞解冻

1. 在37°C水浴中摇晃冷冻细胞瓶大约60秒。一旦细胞解冻（可能比60秒稍快或稍慢），迅速将瓶中全部内容物转移到含有10毫升预温的解冻培养基1的试管中。

注意：在37°C水浴中放置过久会导致细胞活性迅速丧失。

2. 立即以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基，并在5毫升预温的解冻培养基1中重悬细胞。

3. 将重悬的细胞转移到T25或T75培养瓶中，并在37°C的5% CO2培养箱中培养。

4. 培养24小时后，检查细胞附着和活性。更换为新鲜的解冻培养基1，并在37°C的5% CO2培养箱中继续培养，直到细胞准备好传代。

5. 细胞应在完全融合前传代。在第一次传代及后续传代中，使用生长培养基1B。

细胞传代

1. 抽吸培养基，用无Ca2+/Mg2+的磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗细胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基1B并转移到试管中。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基，并在生长培养基1B中重悬细胞。

4. 按照推荐的次培养比例1:5至1:10，每周一次或两次接种到新的培养容器中。

注意：解冻后和细胞密度低时，细胞可能生长速度较慢。在这些情况下，建议以1:4的比例分离细胞。经过几次传代后，细胞生长速度增加，可以使用更高的比例进行分离。

细胞冷冻

1. 抽吸培养基，用无Ca2+/Mg2+的PBS冲洗细胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基1B并计数细胞。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基，并在4°C的细胞冷冻培养基（BPS Bioscience #79796）中重悬细胞至约2 x 10^6细胞/毫升。

4. 将1毫升的细胞悬浮液分装到每个冷冻小瓶中。将小瓶放置在保温容器中缓慢冷却，并在-80°C下过夜保存。

5. 次日将小瓶转移到液氮中进行长期储存。

注意：建议在早期传代时扩增细胞并至少冷冻10瓶以备将来使用。

数据展示：

图：TGFβ1激动剂在TGFβ/Activin A响应型荧光素酶报告基因HEK293细胞系中诱导报告基因激活。

TGFβ/Activin A响应型荧光素酶报告基因HEK293细胞与逐渐增加浓度的人类TGFβ1（#90900）共同孵育18小时。使用ONE-Step?荧光素酶检测系统（#60690）测量荧光素酶活性。结果表示为与无激动剂的细胞活性相比，SBE荧光素酶报告基因表达的倍数诱导。

文献参考：

Moustakas A, et al., 2001 J. Cell Science. 114: 4359-69.

BPS Bioscience是一家通过ISO 9001:2015认证的生命科学领域的供应商，公司一直致力于开发药物研发领域的重组蛋白酶、蛋白酶活性/抑制剂筛选试剂盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年创立，从创立至今一直致力于提供药物研发领域的创新解决方案，以推动新的药物发现。公司主要关注的领域包括免疫疗法、表观遗传学、新型冠状病毒、CRISPR、细胞信号转导等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、组蛋白去甲基化酶、组蛋白甲基化转移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

作为BPS Bioscience在中国的区域代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BPS Bioscience以及客户订制化服务。