TetR HEK293细胞系是一种表达四环素抗性元件(TetR)阻遏蛋白的HEK293细胞系,构建了一个基于四环素或多西环素在细胞培养基中存在与否的可诱导系统。这些细胞可以转染感兴趣的靶基因,该基因受强启动子和四环素操纵子的控制。在没有四环素或多西环素的情况下,TetR结合到操纵子上并抑制转录。当接触到四环素或多西环素时,TetR对四环素抗性元件的亲和力降低,从而发生感兴趣的靶基因的表达。该细胞系已通过多西环素刺激进行了验证。
背景
TetR,或四环素阻遏蛋白在四环素(Tc)抗生素抗性发展中发挥作用。Tc是一类通过干扰蛋白质合成来杀死细菌的抗生素。对Tc的抗性是通过表达Tc抗性基因发生的,这些基因由TetR调节。除了研究抗生素抗性的机制外,TetR的使用已被用作调节启动子表达的模式,从而创建可诱导的细胞模型。这些可诱导的细胞模型对于理解细胞途径至关重要。
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产品名称 | 货号 | 详情 |
TetR HEK293 细胞系 | BPS-71227 | 查看 |
应用
瞬时四环素诱导的感兴趣靶蛋白的表达。
细胞解冻
1. 在37°C水浴中摇晃冷冻细胞瓶大约60秒。一旦细胞解冻(可能比60秒稍快或稍慢),迅速将瓶中全部内容物转移到含有10毫升预温的解冻培养基1的试管中。
注意:在37°C水浴中放置过久会导致细胞活性迅速丧失。
2. 立即以300 x g的速度离心细胞5分钟,去除培养基,并在5毫升预温的解冻培养基1中重悬细胞。
3. 将重悬的细胞转移到T25培养瓶中,并在37°C的5% CO2培养箱中培养。
4. 培养24小时后,检查细胞附着和活性。更换为新鲜的解冻培养基1,并在37°C的5% CO2培养箱中继续培养,直到细胞准备好传代。
5. 细胞应在完全融合前传代。在第一次传代及后续传代中,使用生长培养基1H。
细胞传代
1. 抽吸培养基,用无Ca2+/Mg2+的磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗细胞,并用0.05%胰蛋白酶/EDTA从培养容器中分离细胞。
2. 一旦细胞分离,加入生长培养基1H并转移到试管中。
3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟,去除培养基,并在生长培养基1H中重悬细胞。
4. 按照推荐的次培养比例1:8至1:20,每周一次或两次接种到新的培养容器中。
注意:解冻后和细胞密度低时,细胞可能生长速度较慢。在这些情况下,建议以1:4的比例分离细胞。经过几次传代后,细胞生长速度增加,可以使用更高的比例进行分离。
细胞冷冻
1. 抽吸培养基,用无Ca2+/Mg2+的PBS冲洗细胞,并用0.05%胰蛋白酶/EDTA从培养容器中分离细胞。
2. 一旦细胞分离,加入生长培养基1H并计数细胞。
3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟,去除培养基,并在4°C的细胞冷冻培养基(BPS Bioscience #79796)中重悬细胞至约2 x 10^6细胞/毫升。
4. 将1毫升的细胞悬浮液分装到每个冷冻小瓶中。将小瓶放置在保温容器中缓慢冷却,并在-80°C下过夜保存。
5. 次日将小瓶转移到液氮中进行长期储存。
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