TCF/LEF报告基因-HEK293细胞系(Wnt信号通路)含有一个受TCF/LEF响应元件控制的萤火虫荧光素酶基因,该基因已稳定整合入HEK293细胞中。该细胞系已验证对小鼠和人类Wnt3a的刺激反应,以及对Wnt/β-连环蛋白信号通路抑制剂的处理反应。
背景
TCF/LEF报告基因-HEK293细胞系(Wnt信号通路)旨在监测Wnt/β-连环蛋白信号通路的活性。Wnt通路控制着胚胎发育、成年器官维持和疾病中大量且多样化的细胞命运决定。Wnt蛋白结合到细胞表面受体,启动一个信号级联反应,导致β-连环蛋白的稳定化和核转移。β-连环蛋白随后结合到核内的TCF/LEF转录因子,导致Wnt响应基因的转录和表达。
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TCF/LEF 报告基因 - HEK293 细胞系(Wnt 信号通路) | BPS-60501 | 查看 |
应用
? 监测Wnt信号通路的活性。
? 筛选Wnt/β-连环蛋白信号通路的化合物活性。
细胞培养协议
细胞解冻
1. 为了解冻细胞,建议快速将液氮中的冷冻细胞在37°C水浴中解冻,转移到含有10毫升解冻培养基1(不含遗传素)的试管中,以1000转/分钟的速度离心细胞,重悬细胞于5毫升预温的解冻培养基1(不含遗传素)中,将重悬的细胞转移到T25培养瓶中,并在37°C的5% CO2培养箱中培养过夜。
2. 第二天,用新鲜的预热解冻培养基1(不含遗传素)更换培养基,并在37°C的CO2培养箱中继续培养,直到细胞准备好分裂。
3. 细胞应在达到完全融合前进行分裂。
4. 在第一次传代时切换到生长培养基1B(含遗传素)。
细胞传代
1. 为了传代细胞,用磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗细胞,用0.05%胰蛋白酶/EDTA从培养容器中分离细胞。
2. 分离后,加入生长培养基1B(含遗传素)并转移到试管中,离心细胞,重悬细胞于生长培养基1B(含遗传素)中,并将适量的细胞悬浮液接种到新的培养容器中。
3. 次培养比例:每周1:5至1:10或每周两次。
注意:解冻后和在低密度时,细胞可能生长速度较慢。建议在培养初期以大约1:4的比例分离细胞。经过几次传代后,细胞生长速度增加,可以以更高的比例分离细胞。
细胞冷冻
1. 为了冷冻保存细胞,去除培养基,用磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗细胞,并用0.05%胰蛋白酶/EDTA从培养容器中分离细胞。
2. 分离后,加入生长培养基1B并计数细胞,然后转移到试管中,离心细胞,并在4°C冷冻培养基(BPS Bioscience #79796或10% DMSO + 90% FBS)中重悬至约2 x 10^6细胞/毫升。
3. 将1毫升的细胞等分到冷冻小瓶中。将小瓶放置在保温容器中缓慢冷却,并在-80°C下过夜保存。
4. 次日转移到液氮中储存。
注意:建议扩增细胞并在早期传代时至少冷冻10瓶细胞以备将来使用。
IWR-1-endo抑制剂量反应曲线。结果以发光百分比表示。在没有IWR-1-endo的情况下用Wnt3a刺激的细胞的背景减去的发光量设定为100%。
图:IWR-1吲哚抑制剂量反应曲线。结果以发光百分比显示。这个在不存在IWR-1-endo的情况下,用Wnt3a刺激的细胞的背景减光发光设置为100%.
文献参考:
1. Clevers, H. (2006) Wnt/beta-catenin signaling in development and disease. Cell 127(3):469-480.
2. Chen, B. et al. (2009) Small molecule-mediated disruption of Wnt-dependent signaling in tissue regeneration and cancer. Nature Chemical Biology 5(2):100-10
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