BPS Bioscience Wnt信号通路活性监测：TCF/LEF 报告基因 - HEK293 细胞系（Wnt 信号通路）

TCF/LEF报告基因-HEK293细胞系（Wnt信号通路）含有一个受TCF/LEF响应元件控制的萤火虫荧光素酶基因，该基因已稳定整合入HEK293细胞中。该细胞系已验证对小鼠和人类Wnt3a的刺激反应，以及对Wnt/β-连环蛋白信号通路抑制剂的处理反应。

背景

TCF/LEF报告基因-HEK293细胞系（Wnt信号通路）旨在监测Wnt/β-连环蛋白信号通路的活性。Wnt通路控制着胚胎发育、成年器官维持和疾病中大量且多样化的细胞命运决定。Wnt蛋白结合到细胞表面受体，启动一个信号级联反应，导致β-连环蛋白的稳定化和核转移。β-连环蛋白随后结合到核内的TCF/LEF转录因子，导致Wnt响应基因的转录和表达。

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应用

? 监测Wnt信号通路的活性。

? 筛选Wnt/β-连环蛋白信号通路的化合物活性。

细胞培养协议

细胞解冻

1. 为了解冻细胞，建议快速将液氮中的冷冻细胞在37°C水浴中解冻，转移到含有10毫升解冻培养基1（不含遗传素）的试管中，以1000转/分钟的速度离心细胞，重悬细胞于5毫升预温的解冻培养基1（不含遗传素）中，将重悬的细胞转移到T25培养瓶中，并在37°C的5% CO2培养箱中培养过夜。

2. 第二天，用新鲜的预热解冻培养基1（不含遗传素）更换培养基，并在37°C的CO2培养箱中继续培养，直到细胞准备好分裂。

3. 细胞应在达到完全融合前进行分裂。

4. 在第一次传代时切换到生长培养基1B（含遗传素）。

细胞传代

1. 为了传代细胞，用磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗细胞，用0.05%胰蛋白酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 分离后，加入生长培养基1B（含遗传素）并转移到试管中，离心细胞，重悬细胞于生长培养基1B（含遗传素）中，并将适量的细胞悬浮液接种到新的培养容器中。

3. 次培养比例：每周1:5至1:10或每周两次。

注意：解冻后和在低密度时，细胞可能生长速度较慢。建议在培养初期以大约1:4的比例分离细胞。经过几次传代后，细胞生长速度增加，可以以更高的比例分离细胞。

细胞冷冻

1. 为了冷冻保存细胞，去除培养基，用磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗细胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 分离后，加入生长培养基1B并计数细胞，然后转移到试管中，离心细胞，并在4°C冷冻培养基（BPS Bioscience #79796或10% DMSO + 90% FBS）中重悬至约2 x 10^6细胞/毫升。

3. 将1毫升的细胞等分到冷冻小瓶中。将小瓶放置在保温容器中缓慢冷却，并在-80°C下过夜保存。

4. 次日转移到液氮中储存。

注意：建议扩增细胞并在早期传代时至少冷冻10瓶细胞以备将来使用。

IWR-1-endo抑制剂量反应曲线。结果以发光百分比表示。在没有IWR-1-endo的情况下用Wnt3a刺激的细胞的背景减去的发光量设定为100%。

图:IWR-1吲哚抑制剂量反应曲线。结果以发光百分比显示。这个在不存在IWR-1-endo的情况下，用Wnt3a刺激的细胞的背景减光发光设置为100%.

文献参考：

1. Clevers, H. (2006) Wnt/beta-catenin signaling in development and disease. Cell 127(3):469-480.

2. Chen, B. et al. (2009) Small molecule-mediated disruption of Wnt-dependent signaling in tissue regeneration and cancer. Nature Chemical Biology 5(2):100-10

BPS Bioscience是一家通过ISO 9001:2015认证的生命科学领域的供应商，公司一直致力于开发药物研发领域的重组蛋白酶、蛋白酶活性/抑制剂筛选试剂盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年创立，从创立至今一直致力于提供药物研发领域的创新解决方案，以推动新的药物发现。公司主要关注的领域包括免疫疗法、表观遗传学、新型冠状病毒、CRISPR、细胞信号转导等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、组蛋白去甲基化酶、组蛋白甲基化转移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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