BPS Bioscience OX40/NF-κB 荧光素酶报告基因 HEK293 细胞系，新型免疫调节剂筛选

OX40/NF-κB荧光素酶报告基因HEK293细胞系是一种表达由NF-κB（核因子κB）响应元件控制的萤火虫荧光素酶报告基因的HEK293细胞系，以及表达OX-40（肿瘤坏死因子受体超家族成员4，GenBank登录号NM_003327）。

该细胞系已通过流式细胞术以及OX40L和抗OX40拮抗抗体进行了验证。

图1：OX40/NF-κB荧光素酶报告基因HEK293细胞系的作用机制图示。

背景：

OX40，也称为CD134，是一种共刺激受体，属于肿瘤坏死因子（TNF）受体家族，表达在T细胞表面。OX40与其配体OX40L（也称为CD252）结合，可以增强T细胞的激活、分化、增殖、存活和T细胞效应功能。OX40L存在于NK细胞中，参与它们的激活和细胞毒性特征，以及树突状细胞中。OX40可以与TRAF（TNFR相关因子）家族蛋白成员结合，这些蛋白随后可以调节NF-κB（核因子κB）信号通路。OX40和OX40L可以在癌细胞中找到，如AML（急性髓细胞性白血病）和乳腺癌细胞。研究表明，OX40激动剂可以增加抗肿瘤免疫并改善前临床研究中的无瘤存活。或者，OX40拮抗剂作为治疗炎症性疾病的潜在药物。开发新的OX40/OX40L活性调节剂是治疗实体瘤或自身免疫性疾病患者的有希望的治疗方法。

作为BPS Bioscience在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BPS Bioscience热销产品OX40/NF-κB 荧光素酶报告基因 HEK293 细胞系。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

应用：

- 表征OX40活性及其与配体的结合。

- 在细胞模型中筛选调节OX40信号的化合物。

细胞培养协议：

注意：HEK293细胞源自人类材料，因此建议采取适当的安全预防措施。

细胞解冻：

1. 在37°C水浴中旋转冷冻细胞瓶大约60秒。细胞解冻后（可能比60秒稍快或稍慢），迅速将瓶中的内容转移到含有10毫升预热的解冻培养基1的管中。

注意：在37°C水浴中放置细胞太久会导致活性迅速丧失。

2. 立即以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基，并在5毫升预热的解冻培养基1中重悬细胞。

3. 将重悬的细胞转移到T25或T75培养瓶中，并在37°C、5% CO2培养箱中培养。

4. 培养24小时后，检查细胞附着和活力。更换为新鲜的解冻培养基1，并在37°C、5% CO2培养箱中继续培养，直到细胞准备好传代。

5. 细胞应在完全融合前传代。在第一次传代及后续传代中，使用生长培养基1A。

细胞传代：

1. 抽吸培养基，用无Ca2+/Mg2+的磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗细胞，并用0.05% Trypsin/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基1A并转移到管中。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基，并在生长培养基1A中重悬细胞。

4. 按照推荐的次培养比例1:10每周一次或两次将细胞种植到新的培养容器中。

细胞冷冻：

1. 抽吸培养基，用无Ca2+/Mg2+的PBS冲洗细胞，并用0.05% Trypsin/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基1A并计数细胞。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基，并在4°C细胞冷冻培养基（BPS Bioscience #79796）中重悬细胞，细胞浓度约为2 x 10^6细胞/ml。

4. 将1毫升的细胞悬浮液分装到每个冷冻瓶中。将瓶子放入绝缘容器中缓慢冷却，并在-80°C下过夜保存。

5. 次日将瓶子转移到液氮中进行长期存储。

注意：建议扩展细胞并在早期传代时至少冷冻10瓶细胞以备将来使用。

数据示例：

图

图：OX40/NF-κB荧光素酶报告基因HEK293细胞系中OX40的细胞表面表达。

OX40/NF-κB荧光素酶报告基因HEK293细胞（蓝色）和对照HEK293细胞（红色）用抗OX40抗体，PE标记（#72064）染色，并通过流式细胞术分析。Y轴代表细胞数量百分比。X轴表示PE强度。

文献参考：

Peng K., et al., 2014 AAPS J. 16(4): 625–633.

Marconato M., et al., 2022 Scientific Reports 12: 15856

BPS Bioscience是一家通过ISO 9001:2015认证的生命科学领域的供应商，公司一直致力于开发药物研发领域的重组蛋白酶、蛋白酶活性/抑制剂筛选试剂盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年创立，从创立至今一直致力于提供药物研发领域的创新解决方案，以推动新的药物发现。公司主要关注的领域包括免疫疗法、表观遗传学、新型冠状病毒、CRISPR、细胞信号转导等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、组蛋白去甲基化酶、组蛋白甲基化转移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

作为BPS Bioscience在中国的区域代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BPS Bioscience以及客户订制化服务。