Signal-Seeker泛素化检测试剂盒，对照磁珠+抗泛素-HRP，泛素化信号特异性一目了然

产品概述

由艾美捷代理Cytoskeleton推出的Signal-Seeker泛素化检测试剂盒（货号 BK161）是一款用于检测细胞内目标蛋白（POI）内源性泛素化的亲和富集试剂盒。该试剂盒利用亲和磁珠从细胞或组织裂解液中富集泛素化修饰蛋白，再通过标准 Western blot 流程，由用户使用自有的目标蛋白一抗进行检测。试剂盒适用于验证转染 POI 或蛋白质组学方法获得的泛素化数据，监测 PROTAC 降解效率，以及发现新的调控机制与生物标志物。

检测原理

Signal-Seeker 系列试剂盒采用亲和磁珠从任意细胞或组织裂解液中富集修饰蛋白，富集后的蛋白群体通过标准 Western blot 流程分析，修饰的目标蛋白由终端用户使用自有一抗进行检测。该系列试剂盒覆盖多种关键翻译后修饰（PTM），包括磷酸化（磷酸酪氨酸）、泛素化、SUMO 化及乙酰化。各试剂盒设计上可协同使用，便于从单一样品裂解液中生成 PTM 图谱。

试剂盒组成（10–30 次实验）

BlastR 裂解缓冲液

BlastR 稀释缓冲液

BlastR-2 洗涤缓冲液

去泛素化/去 SUMO 化抑制剂

蛋白酶抑制剂混合物

泛素化亲和磁珠

对照磁珠

抗泛素-HRP 抗体

Precision Red 高级蛋白检测试剂

磁珠洗脱缓冲液

DMSO

化学发光检测试剂

离心柱收集管

BlastR 滤器

自备设备与材料

使用本试剂盒需自备：目标细胞系或组织、PBS pH 7.4 缓冲液、细胞刮刀、液氮（用于速冻裂解液）、2-巯基乙醇、SDS-PAGE 系统与缓冲液、PVDF 膜、Western 转膜系统与缓冲液、封闭试剂、目标蛋白一抗、HRP 标记二抗及化学发光成像仪。

关键参数

灵敏度：已验证可检测多种目标蛋白的内源性泛素化

起始样本量：200 ug – 1 mg 裂解液

实验时长：约 10 小时，通常分两天完成

生物学活性验证

本试剂盒使用亲和磁珠从任意细胞或组织裂解液中富集泛素化（单泛素化、多泛素化及多聚泛素化）蛋白。富集后的蛋白群体通过标准 Western blot 流程分析，修饰的目标蛋白由用户使用自有一抗进行检测。该流程可有效区分泛素化修饰信号与总蛋白水平，为内源性泛素化研究提供可靠数据。

应用领域

检测目标蛋白（POI）的内源性泛素化

发现 POI 的新型调控机制

验证转染 POI 产生的泛素化数据

验证蛋白质组学方法获得的泛素化数据

监测 PROTAC 降解效率

发现新型生物标志物

应用建议

该试剂盒适用于需要评估目标蛋白泛素化修饰状态的研究场景。建议每次实验同时设置对照磁珠组，以区分非特异性结合信号。裂解液应速冻保存，避免反复冻融以维持泛素化修饰的稳定性。由于泛素化与去泛素化处于动态平衡，裂解缓冲液中已包含去泛素化酶抑制剂，操作应尽量快速并在冰上进行。对于 PROTAC 研究，可通过比较药物处理组与对照组的目标蛋白泛素化信号，评估降解效率。该试剂盒与 Signal-Seeker 系列其他 PTM 检测试剂盒兼容，可从同一样品中并行分析多种修饰，构建目标蛋白的 PTM 调控图谱。

文献参考

1. Wang, Y, et al. 2015. Sequential posttranslational modifications regulate PKC degradation. Mol. Biol. Cell. 27: 410-420.

2. Guo, Z, et al. 2012. Sequential posttranslational modifications program FEN1 degradation during cell cycle progression. Mol. Cell. 47: 444-456.

3. Luo H-B, et al. 2014. SUMOylation at K340 inhibits Tau degradation through deregulating its phosphorylation and ubiquitination. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 111: 16586-16591.

4. Satija Y.K. & Das S. 2016. Tyr99 phosphorylation determines the regulatory milieu oftumor suppressor p73. Oncogene 35: 513-5