HiLyte 488绿色荧光标记纤连蛋白--细胞侵袭与ECM降解实验即用底物

产品概述

由艾美捷代理Cytoskeleton推出的HiLyte 488绿色荧光标记纤连蛋白（货号 FNR02）是一款绿色荧光标记的纤连蛋白，适用于活细胞成像中纤连蛋白掺入、重塑与降解的可视化研究，以及细胞与细胞外基质（ECM）相互作用的分析。该产品以冻干粉形式提供，标记效率与生物学活性均经过验证，可广泛应用于细胞黏附、迁移、侵袭及机械生物学研究。

背景信息

细胞外基质（ECM）由胶原、非胶原糖蛋白和蛋白聚糖组成，这些成分由细胞分泌，形成围绕细胞与组织的 ECM 网络，调控细胞动态行为、细胞骨架组织及细胞间通讯等多种功能。

纤连蛋白是一种高分子量（约 440 kDa）糖蛋白，存在于细胞外基质和血浆中，由两个大小在 235–270 kDa 之间（因选择性剪接而异）的亚基组成。分泌型纤连蛋白二聚体为可溶性蛋白，在 ECM 中聚合成更高阶的纤维。纤连蛋白在细胞黏附、生长、迁移、肌动蛋白动态及分化中发挥重要作用，对伤口愈合和胚胎发育等过程至关重要。这些功能多通过纤连蛋白与整合素受体蛋白结合介导。纤连蛋白表达、降解和组织的改变与癌症、纤维化等多种病理过程相关。除整合素外，纤连蛋白还可与胶原、纤维蛋白及硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（如 syndecan）等 ECM 成分结合。

产品特性

本产品纤连蛋白纯化自牛血浆，为高分子量（约 440 kDa）糖蛋白。蛋白通过随机表面赖氨酸共价连接 HiLyte 488 染料。

核心参数：

激发波长：502 nm，发射波长：527 nm（绿色光谱）

标记化学计量：每个纤连蛋白二聚体约 1–3 个染料分子

游离染料：最终产品中可检测到的游离染料 <5%

提供形式：冻干粉

纯度：>80%（经 4–20% SDS-PAGE 考马斯亮蓝染色扫描光密度测定）

应用领域

活细胞成像中纤连蛋白掺入、重塑与降解的可视化，用于细胞/ECM 相互作用研究

纤连蛋白结合细胞的 FACS 分析

细胞侵袭实验

机械生物学与组织工程研究

生物学活性

FNR02 的生物学活性通过其作为细胞侵袭底物的能力得到验证，该能力通过 ECM 降解实验进行监测。这表明荧光标记后的纤连蛋白仍保留支持细胞黏附、迁移与基质重塑的天然功能，可用于对蛋白活性要求较高的功能性实验。

储存与复溶

产品常温运输。冻干蛋白可在 4°C、湿度低于 10%、避光条件下保存 6 个月。

复溶时，先短暂离心使产品集中于管底，用 20 ?l 室温蒸馏水重悬至 1 mg/ml。让蛋白重新溶解 1–2 分钟，期间不要混匀；1–2 分钟后可轻柔吹打 2–3 次以确保完全重悬。避免过度混匀，否则可能导致蛋白聚集。重悬后置于冰上。蛋白所处缓冲液成分为：20 mM Tris-HCl pH 7.6、20 mM NaCl、0.1 mM EDTA、15 mM BME、5%（w/v）蔗糖。

浓缩蛋白应按实验用量分装，液氮速冻后于 -70°C 保存，可稳定 6 个月。工作浓度需用适当缓冲液或组织培养基进一步稀释。HiLyte Fluor? 488 标记纤连蛋白为易损蛋白，应小心操作，避免反复冻融。

应用建议

该产品适用于需要实时追踪纤连蛋白动态的活细胞成像实验。其绿色光谱特性使其可与橙色、红色或远红荧光探针（如罗丹明纤连蛋白、SPY555、SPY650 等）联合使用，实现多通道成像。在细胞侵袭与 ECM 降解实验中，HiLyte 488 标记的纤连蛋白可作为荧光底物，直观显示细胞对基质的降解与重塑过程。在 FACS 分析中，可用于定量检测纤连蛋白结合细胞群体。与罗丹明标记纤连蛋白（FNR01）相比，本产品为绿色通道，更适合与红色/远红探针搭配的多色实验设计。建议根据具体实验体系优化蛋白包被浓度与孵育条件，并在正式实验前进行预实验以确定最佳工作浓度。

文献参考

1. Guidebook to the extracellular matrix and adhesion proteins. 1993. Oxford University Press. Ed. Kreis T and ValeR.

2. Pankov R, Yamada KM . 2002. "Fibronectin at a glance".Journal of Cell Sci. 20 115: 3861-3863.

3. Williams CM, Engler AJ, Slone RD, Galante LL, Schwarzbauer JE. 2008. “Fibronectin expression modulates mammary epithelial cell proliferation during acinar differentiation.Cancer Research. 9 68: 3185-8192.

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5. Artym VV. Et al. 2009. ECM degradation assay for analyzing local cell invasion. Methods in molecular biology,Extracellular matrix protocols, vol. 522: 211-219.HumanaPress.