Ras G-LISA GTPase活化检测试剂盒，助力原代细胞与稀缺活检组织研究

产品概述

Ras小G蛋白作为分子开关，通过多种效应蛋白介导细胞信号传导。哺乳动物Ras亚家族包括H-Ras、N-Ras、K-Ras4A和K-Ras4B四个成员，在细胞增殖、分化及凋亡等多种生物学功能中发挥关键调控作用。Ras开关的运作机制是在活性GTP结合状态与非活性GDP结合状态之间交替切换。约30%的人类恶性肿瘤中存在导致Ras组成性活化（持续GTP结合状态）的致癌突变，这使得Ras成为抗癌药物研发的重要靶点。

研究发现，Ras效应蛋白特异性识别GTP结合形式的Ras，基于此原理已开发出亲和纯化法用于分离和检测生物样品中的活化Ras。传统Ras“pull-down”活化检测通常采用偶联琼脂糖珠的Ras效应蛋白RBD结构域，通过活性Ras与RBD的相互作用将其从生物样品中分离，再经Western blot分析以确定活性Ras水平。然而，该方法存在耗时长、需大量总蛋白、通量低且仅能半定量等局限性。

为克服上述不足，由艾美捷代理Cytoskeleton推出的Ras G-LISA GTPase活化检测试剂盒（比色法，货号BK131）提供了一种快速、定量、高灵敏度的替代方案。

主要应用

细胞和组织裂解液中活化（GTP结合）Ras蛋白的检测

裂解液量有限时的首选方案（如原代细胞培养）

Ras信号通路研究

Ras活化抑制剂的高通量筛选

试剂盒组分（96次测定，板条式设计支持灵活使用）

96孔Ras-GTP结合板

抗Pan Ras检测抗体

HRP标记二抗

Ras对照蛋白（组成型活性H-Ras）

细胞裂解缓冲液（优化用于维持GTPase的GTP结合状态）

结合缓冲液

洗涤缓冲液

抗原呈递缓冲液

抗体稀释缓冲液

HRP比色检测试剂A和B

HRP终止液

Precision Red先进蛋白检测试剂

蛋白酶抑制剂混合物

板条架

需自备设备与材料

待测细胞裂解液

细胞刮刀

浓硫酸（1mL）

液氮（用于速冻裂解液）

轨道微板摇床（≥200rpm，一台4°C，一台室温）

多道移液器

酶标仪（490nm）

检测原理与性能参数

本试剂盒采用G-LISA?技术，将效应蛋白的Ras结合结构域（RBD）偶联于96孔板条上，特异性捕获活性Ras（GTP结合形式），随后通过基于ELISA的比色法进行检测和定量。

关键性能指标

定量检测：输出绝对定量数据，优于传统pull-down法的半定量结果

检测灵敏度：可在50pg至2ng活化Ras范围内呈线性响应

检测特异性：识别N-Ras、H-Ras、K-Ras（可适配特定Ras亚型检测）

样品需求量低：仅需10-50ug细胞或组织裂解液（尤其适合原代细胞等珍贵样品）

检测时长：约3小时即可完成

产品优势

本试剂盒有效克服了传统pull-down法的多项局限：将整体检测时间从传统方法的1-2天缩短至约3小时；样品需求量由毫克级降至微克级，适于稀有细胞样品；基于ELISA的定量体系避免了Western blot的灰度半定量偏差；96孔板板条式设计支持灵活开展单次或多次实验，适配高通量筛选需求。随附的组成型活性H-Ras对照蛋白可用于验证实验体系。

*本产品仅供研究使用，不可用于诊断目的。

文献参考

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