Rac1 G-LISA活化检测试剂盒，精准捕获活化Rac1的低丰度信号变化

一、产品概述

Rac1是Rho家族小GTP酶的重要成员，在细胞骨架重构、细胞迁移、侵袭及肿瘤发生发展中发挥关键调控作用。Rac1的活化状态（GTP结合态与GDP结合态之间的切换）直接决定其下游信号通路的开启与关闭，因此精准定量检测Rac1的活化水平对于信号转导研究和药物筛选具有重要意义。

由艾美捷代理Cytoskeleton推出的Rac1 G-LISA活化检测试剂盒（比色法）（货号：BK128）采用亲和结合与ELISA比色法相结合的原理，通过特异性捕获细胞或组织裂解液中的活化态（GTP结合）Rac1，实现对该蛋白活化水平的快速、灵敏、定量检测。试剂盒采用96孔条带式板设计，支持单次或多次实验的灵活安排，尤其适合样本量受限的应用场景。

二、核心应用场景

本试剂盒主要适用于以下研究领域：

细胞和组织裂解液中活化态（GTP结合）Rac1蛋白的定量检测

原代细胞培养等裂解液样本量受限情况下的Rac1活化分析

Rac1介导信号通路的激活与调控机制研究

Rac1活化抑制剂的筛选与活性评估

三、试剂盒组分与材料清单

提供的试剂与耗材（24–96次反应，条带式可拆分使用）：

96孔Rac1-GTP结合板

抗Rac1一抗

HRP标记二抗

组成型活性Rac1对照蛋白

细胞裂解液（针对GTP酶GTP结合状态维持优化）

结合缓冲液、洗涤缓冲液、抗原呈递缓冲液、抗体稀释缓冲液

HRP比色检测试剂A液与B液、HRP终止液

Precision Red总蛋白定量试剂、蛋白酶抑制剂混合物、板架

需自备的设备与材料：

细胞裂解液

细胞刮刀（用于细胞收获）

浓硫酸（1 ml，用于终止液配制）

液氮（用于裂解液速冻）

轨道微孔板摇床两台（一台4°C、一台室温，转速不低于200 rpm）

多通道移液器

酶标仪（检测波长490 nm）

四、检测原理

本试剂盒采用G-LISA（GTPase-Linked Immunosorbent Assay）技术平台。其核心原理如下：将效应蛋白的Rac/Cdc42结合结构域（PBD）预先包被于96孔板孔内。当加入细胞或组织裂解液后，活化态（GTP结合）的Rac1蛋白被特异性捕获固定于孔板表面，而失活态（GDP结合）的Rac1则于后续洗涤步骤中被清除。随后，依次加入Rac1特异性抗体和HRP标记二抗，通过比色法对捕获的活化Rac1进行定量检测。

五、关键性能参数

参数 | 指标

检测类型 | 定量比色法（ELISA基础）

检测特异性 | Rac1

检测灵敏度 | 活化Rac1线性范围100 pg – 2 ng

样本需求量 | 每孔10–50 ug裂解液总蛋白

总耗时 | 约3小时

反应通量 | 24–96次（条带式可拆分）

六、操作流程与要点

基本操作流程：

1. 制备细胞或组织裂解液（含蛋白酶抑制剂，建议液氮速冻后于–80°C保存）

2. 使用Precision Red试剂测定裂解液总蛋白浓度，统一上样量（10–50 μg/孔）

3. 将裂解液加入Rac1-GTP结合板，于4°C摇床孵育（活化Rac1与包被蛋白结合）

4. 洗涤去除未结合成分及GDP结合的失活Rac1

5. 抗原呈递处理

6. 加入抗Rac1一抗孵育，洗涤

7. 加入HRP标记二抗孵育，洗涤

8. 加入HRP底物显色，终止后于490 nm读取吸光度

关键注意事项：

裂解液制备建议使用液氮速冻并避免反复冻融，以防GTP水解导致信号衰减

结合步骤须在4°C条件下进行，确保GTP结合状态的稳定

活化水平参照的建立：务必设置非活化对照（血清饥饿处理），通过比较活化组与对照组的吸光度值计算Rac1活化倍数

总蛋白定量是确保结果可比性的前提，建议对各样本总蛋白进行准确定量后统一上样

七、产品优势总结

BK128 Rac1 G-LISA 试剂盒基于成熟的亲和捕获-ELISA比色原理，提供高特异性（针对Rac1）、高灵敏度（线性范围100 pg–2 ng）的活化Rac1定量检测方案。其条带式96孔板设计支持灵活的通量选择（24–96次反应），尤其适合裂解液样本量受限的原代细胞等研究场景。约3小时的检测时长可满足实验对时效性的要求。内置组成型活性Rac1对照蛋白便于实验体系验证，配套的Precision Red总蛋白定量试剂简化了上样量归一化操作，为Rac1信号通路研究和抑制剂筛选提供了标准化的技术解决方案。

文献参考

1. Lerm M., et al. 1999. Deamidation of Cdc42 and Rac by Escherichia coli cytotoxic necrotizing factor 1: activation of c-Jun N-terminal kinase in HeLa cells. Infection and immu-nity. 67, 496-503.