猪源微管蛋白聚合动力学分析试剂盒，从成核到稳态的全过程定量分析

一、产品概述

微管是真核细胞骨架的核心组分，参与有丝分裂、胞内物质运输、细胞形态维持及极性建立等关键生命活动。微管蛋白聚合动力学异常与多种疾病（尤其是肿瘤）密切相关，因此微管蛋白聚合检测体系已成为抗肿瘤药物筛选和微管相关蛋白（MAPs）功能研究的黄金标准工具。

由艾美捷代理Cytoskeleton推出的微管蛋白聚合分析试剂盒（货号：BK006P）采用经典的光散射法原理，通过340 nm波长下吸光度的动态监测，实时追踪微管蛋白聚合成微管的过程。试剂盒提供纯度大于99%的猪源微管蛋白及全套优化缓冲液体系，支持对微管动力学调控因子和靶向微管的药物进行高效、可重复的定量表征。

二、核心应用场景

本试剂盒主要适用于以下研究领域：

抗肿瘤化合物的体外筛选与评估：通过聚合曲线的变化判断化合物对微管聚合的促进或抑制作用，计算IC50/EC50值

微管相关蛋白（MAPs）的功能表征：定量分析MAPs对微管聚合动力学（成核速率、延伸速率、稳态聚合量）的调控效应

靶向微管药物的机制区分：明确化合物属于微管稳定剂（如紫杉烷类）还是去稳定剂（如长春碱类）

微管动力学的基础研究：观测温度、pH、离子强度等因素对聚合行为的影响

三、试剂盒组分与材料清单

提供的试剂与耗材（足够24–30次反应）：

微管蛋白（纯度>99%，猪源）

微管蛋白甘油缓冲液

三磷酸鸟苷（GTP）

紫杉醇（聚合增强剂，阳性对照）

通用微管蛋白缓冲液

DMSO

半面积96孔板

详细操作手册

需自备的设备与材料：

待测蛋白或化合物

温控型酶标仪（具备340 nm动力学读数模式，可读取96孔板）

四、检测原理

本试剂盒基于Shelanski等及Lee等建立的经典方法：微管聚合形成的微管聚合物会引起入射光散射，光散射强度与微管聚合物浓度呈正比，因此在340 nm波长下监测吸光度的变化即可实时反映微管蛋白聚合程度。

阶段 | 名称 | 特征

I | 成核期 | 微管蛋白寡聚体组装为微管核心，吸光度缓慢上升

II | 生长期 | 微管快速延伸延长，吸光度急剧升高

III | 稳态期 | 聚合与解聚达到动态平衡，吸光度维持平台

通过比较对照与化合物处理组的聚合曲线，可明确判断化合物对微管聚合的影响方向与程度。

五、关键性能参数

参数 | 指标

检测原理 | 340 nm光散射（吸光度）

微管蛋白来源与纯度 | 猪脑来源，纯度>99%

每反应蛋白量 | 300 ug

反应体积 | 100 ul

甘油浓度 | 10%

反应通量 | 每试剂盒24–30次反应

变异系数（CV） | 13%

紫杉醇EC50（标准条件） | 0.20 uM

长春碱IC50（标准条件） | 0.88 uM

上述EC50与IC50值可作为实验质控参考，新批次试剂首次使用时建议以紫杉醇和长春碱作为阳性对照验证体系性能。

六、操作流程要点

基本操作流程：

1. 将微管蛋白于冰上解冻，用通用微管蛋白缓冲液稀释至工作浓度

2. 在冰上配制含GTP的反应混合液

3. 将待测化合物（或等体积溶剂对照）加入半面积96孔板指定孔中

4. 快速将反应混合液加入各孔（操作需迅速，避免聚合提前启动）

5. 立即将96孔板置于预热至37°C的酶标仪中

6. 启动动力学程序，于340 nm波长下连续读数（建议每30–60秒采集一次，持续30–60分钟）

关键注意事项：

所有操作在冰上进行，直至启动聚合反应（37°C）

GTP需现用现配，避免反复冻融导致水解

各孔加样时间应保持一致，确保动力学曲线的可比性

待测化合物若含有机溶剂，需设置相应浓度溶剂对照以排除干扰

七、产品优势总结

BK006P试剂盒基于业内成熟的340 nm光散射法原理，提供纯度高于99%的微管蛋白和严格优化的缓冲体系，确保聚合反应的稳定性和批间一致性。其96孔板半面积设计在降低试剂消耗的同时保持较高的检测通量，适合中等规模药物筛选。内置阳性对照（紫杉醇与长春碱）参考值便于实验人员快速评估体系健康度。该试剂盒已广泛应用于抗肿瘤药物研发与微管生物学研究领域，是表征微管靶向化合物和调控蛋白功能的主流筛选工具之一。

文献参考

1. Shelanski ML, Gaskin F. and Cantor CR. 1973. Proceedings of the NationalAcademy of Science, 70, 765-768.

2. Lee JC. and Timasheff SN. 1977. In vitro reconstitution of calf brain microtubules:effects of solution variable. Biochemistry, 16, 1754-1762.

3. Jaing JD, Davis AS, Middleton KM, Ling Y-H, Perez-Soler R, Holland JF. and BekesiG. 1998. 3-Iodoacetamido-benzoylurea: a novel cancericidal tubulin ligand thatinhibits microtubule polymerization, phosphorylates bcl-2 and induces apoptosis intumor cells. Cancer Research, 58, 5389-5395.

4. Davis AS, Middleton KM, Jiang J-D, Wang Y, Weisz I, Ling YH. And Bekesi JG.1999. Novel suicide ligands of tubulin arrest cancer cells in S-phase. Neoplasia, 1,498-507.

5. Davis A.S. and Middleton K.M. 1998. Lyophilized Tubulins. USPTO 6750330.

6. Hyman AA, Middleton KM, Centola M, Mitchison TJ. and Carbon J. 1993. Microtubule-motoractivity of a yeast centromere-binding protein complex. Nature 359, 533-536.

7. Walker, R.A., Salmon, E.D., and Endow, S.A. The Drosophila claret segregationprotein is a minus-end directed motor molecule. Nature 347, 780-782 (990).

8. Amos LA. and Klug A. 1974. Arrangement of subunits in flagellar microtubules. J.Cell Science, 14, 523-530.