抗NBR1（自噬底物NBR1）抗体，灵活适配低丰度与高诱导样本

产品概述

由艾美捷代理Agrisera推出的抗NBR1（自噬底物NBR1）抗体（货号：AS14 2805） 是一款兔源多克隆抗体，免疫原为拟南芥NBR1蛋白的UBA2结构域（C端第二个泛素结合结构域），与GST标签融合表达（UniProt: Q9SB64，TAIR: AT4G24690）。该抗体以血清形式提供，经冻干处理，每支规格为50 ul。推荐复溶体积为50 ul无菌水，复溶后即为原倍血清。建议分装保存于-20°C，避免反复冻融；开盖前请短暂离心，以防管壁或管盖附着的样本损失。

分子量与识别特性

参数 | 数值

理论分子量（拟南芥） | 75 kDa

表观分子量（WB） | 约100 kDa

免疫原 | NBR1的UBA2结构域（GST融合）

*注：观察到的表观分子量高于理论值，可能与蛋白的翻译后修饰或酸性氨基酸组成导致的SDS-PAGE迁移异常有关，属正常现象。

推荐应用与稀释比例

应用 | 推荐稀释度

免疫定位（IL） | 1 : 1000

蛋白质印迹（WB） | 1 : 500 – 1 : 5000（起始推荐1:1000）

物种反应性详述

反应类型 | 物种

已验证反应性 | 拟南芥（*Arabidopsis thaliana*）、小立碗藓（*Physcomitrium patens*）

预测反应性 | 十字花科（Brassicaceae）各属、玉米（*Zea mays*）

已确认无反应性 | 柑橘（*Citrus sinensis*）、烟草（*Nicotiana tabacum*）

若需检测上述列表外的物种，请联系技术支持评估交叉反应可能性。特别提醒，本抗体在烟草中无信号，不建议用于烟草及相关茄科样本。

蛋白背景与功能定位

NBR1（自噬底物NBR1）是真核生物中保守的选择性自噬受体蛋白，在植物中参与以下过程：

受损细胞器（如叶绿体、线粒体）的选择性降解；

胞内微生物（如病原菌）的自噬性清除；

蛋白聚集体和异常结构蛋白的清除；

特定可溶性蛋白的靶向降解。

NBR1作为自噬适配器（autophagic adapter），通过其C端的UBA结构域识别并结合泛素化底物，同时通过其N端与自噬体标志蛋白ATG8相互作用，将底物递送至自噬体进行降解。NBR1含有两个UBA结构域，但仅C端UBA结构域（UBA2，即免疫原靶向区域）具有泛素结合活性。

实验关键要点与操作建议

1. 提取方法与组织类型（关键）：

该抗体的有效检测依赖于特定的提取方法和组织类型，具体操作条件应参考Minina等（2013）发表的方法（详见产品信息引用文献）。

不同组织及处理条件下NBR1蛋白丰度差异显著，建议根据实验体系预实验确定最佳提取方案。

2. Western blot 稀释度优化：

WB稀释范围较宽（1:500–1:5000），具体稀释度需根据样本中NBR1的丰度进行调整。

在自噬诱导条件下（如营养缺乏、氧化胁迫）NBR1表达水平通常上调，可尝试较高稀释度（1:2000–1:5000）；在低丰度样本中建议使用1:500–1:1000。

建议设置阳性对照（如拟南芥幼苗总蛋白，经自噬诱导处理）以验证抗体效价。

3. 阳性与阴性对照：

阳性对照：拟南芥野生型幼苗提取物（建议饥饿处理诱导自噬）。

阴性对照：拟南芥*NBR1*敲除突变体（如SALK T-DNA插入株系）或烟草提取物（已知无反应性）。

4. 免疫定位（IL）注意事项：

推荐稀释度1:1000，需配合适当的固定与通透步骤。

在亚细胞定位实验中，建议与自噬体标志物（如ATG8）进行共定位分析，以验证NBR1在自噬过程中的空间分布变化。

应用场景建议

自噬流监测：WB检测NBR1蛋白水平变化，可与ATG8-II/ATG8-I比值变化协同分析，评估自噬活性。

选择性自噬底物鉴定：通过免疫共沉淀或免疫定位，分析NBR1与候选底物的相互作用。

胁迫响应研究：在营养饥饿、盐胁迫、氧化胁迫等条件下检测NBR1表达动态。

储存与防腐剂定制

冻干及复溶后均建议于-20°C保存。如需在最终产品中添加ProClin防腐剂，可另行提出定制要求。

注意事项

1. 本产品为未纯化血清，背景信号可能高于亲和纯化抗体，建议在封闭液（如5%脱脂牛奶或BSA）中延长封闭时间（室温1–2小时或4°C过夜）以降低非特异性结合。

2. 复溶后请勿在4°C长期存放，血清成分在冷藏条件下易发生沉淀或微生物污染。

总结

AS14 2805 抗体是研究植物选择性自噬的重要工具，特异性靶向拟南芥NBR1的泛素结合功能结构域UBA2。其已验证拟南芥和小立碗藓中的反应性，并预测适用于十字花科及玉米。实验成功的关键在于采用文献指定的提取方法和组织类型，并根据样本丰度灵活调整WB稀释度。该抗体不适用于烟草和柑橘，请在选择物种时注意排除。如需详细实验方案或特殊物种验证，请参考完整产品说明书或联系技术支持团队。

文献参考：

González-Fuente et al. (2026). Bacteria use P-body condensates to attenuate host translation during infection. Sci Adv . 2026 Apr 24;12(17):eaec4477. doi: 10.1126/sciadv.aec4477.

Guan et al. (2025).Arabidopsis phospholipase Dζ2 facilitates vacuolar acidification and autophagy under phosphorus starvation by interacting with VATD. Cell Rep. 2025 Jul 15;44(7):116024. doi: 10.1016/j.celrep.2025.116024.

Hoffman-Sommer et al. (2025). The TRAPPC8/TRS85 subunit of the Arabidopsis TRAPPIII tethering complex regulates endoplasmic reticulum function and autophagy. Plant Physiol. 2025 Mar 1;197(3):kiaf042. doi: 10.1093/plphys/kiaf042.