抗植物细胞色素c氧化酶亚基II（COXII）抗体--线粒体内膜专属标记物，适用于天然与变性电泳

产品概述

由艾美捷代理Agrisera推出的抗植物细胞色素c氧化酶亚基II（COXII）抗体（货号：AS04 053A）是一款兔源多克隆抗体，免疫原为KLH偶联的合成多肽，该多肽序列在已公布的真双子叶植物（如拟南芥AtmG00160）、单子叶植物（如水稻P04373）及小立碗藓（Q1XGA9）的COXII蛋白中完全保守。抗体经免疫原亲和纯化，以冻干形式提供于PBS pH 7.4缓冲体系中，每支规格为50 ug。推荐复溶体积为50 ul无菌水，复溶后浓度约为1 ug/?l。建议分装保存于-20°C，避免反复冻融；开盖前请短暂离心，以防管壁或管盖附着的样本损失。

分子量与识别特性

参数 | 数值

理论分子量（拟南芥） | 29.4 kDa

表观分子量（WB） | 约30 kDa

细胞定位 | 线粒体内膜（专属区室标记物）

推荐应用与稀释比例

应用 | 推荐稀释度

蓝色天然聚丙烯酰胺凝胶电泳（BN-PAGE） | 1 : 1000

蛋白质印迹（WB） | 1 : 1000

物种反应性详述

反应类型 | 物种

已验证反应性 | 拟南芥（叶片提取物及分离线粒体）、猕猴桃、矮桦、油菜、甘蓝、鹰嘴豆、甜瓜、黄瓜、棉花草、大麦、百合、烟草、挪威云杉、大车前、宽叶车前、单花蝇子草、红蝇子草、小立碗藓、普通小麦、硬粒小麦、玉米、蚕豆、红橡木

预测反应性 | 甜瓜、大豆、陆地棉、Neurachne属多种禾草、水稻、小立碗藓、豌豆、小麦、绿豆

已确认无反应性 | 芒果、海带（*Saccharina japonica*）

该抗体的反应性覆盖了双子叶植物、单子叶植物及苔藓，提示其识别表位在陆地植物中高度保守。若需检测上述列表外的物种，请联系技术支持评估交叉反应可能性。

蛋白背景与功能定位

细胞色素c氧化酶（COX，亦称复合体IV）是线粒体呼吸链的末端酶复合物，催化氧气还原为水，位于线粒体内膜。该酶由多个亚基组成，其中亚基1–3形成催化核心：

COXII（亚基2） 含有双核铜A中心，负责接收来自细胞色素c的电子，并将其传递至亚基1的双金属催化中心。

COXII是呼吸链电子传递中的关键环节，其表达水平可作为线粒体氧化磷酸化活性的指标。

本抗体识别的表位在COXII中高度保守，适用于多种高等植物及苔藓样本。

实验关键要点与优化建议

1. 样本制备与分馏（关键）：

该抗体在膜组分（如分离线粒体或富集的内膜制品）中检测信号最优，而在总蛋白提取物中信号较弱。

强烈建议对样本进行亚细胞分馏，至少应制备粗线粒体沉淀，以富集目标蛋白、降低背景干扰。

2. BN-PAGE 操作条件：

样品以洋地黄皂苷（digitonin） 作为去垢剂进行增溶，推荐去垢剂与蛋白质量比为 4:1。

上样量：每孔100 ug 总蛋白（以BCA或Bradford法测定）。

凝胶规格：厚度2 mm，采用 4.5%–16%梯度凝胶，以保证高分子量复合体（如呼吸链超复合物）的有效分离。

一抗稀释度：1:1000，于封闭液中孵育（建议4°C过夜）。

3. Western blot 操作建议：

常规SDS-PAGE后转膜（PVDF或硝酸纤维素膜），一抗以1:1000稀释。

因目标蛋白位于线粒体内膜，总蛋白上样量建议增加至30–50 ug（相对于普通胞质蛋白检测）以获取清晰信号。

使用分离线粒体样本时，上样量可降至10–20 ug。

4. 阳性对照设置：

推荐使用拟南芥分离线粒体作为阳性对照，同时可搭配另一线粒体标记物（如VDAC、HSP60）进行平行检测，以验证分馏质量。

BN-PAGE与WB联用的应用场景

复合体IV完整性评估：BN-PAGE可保留天然状态下COX与其他呼吸链复合物的相互作用，通过抗COXII抗体检测可判断复合体IV是否正常组装或是否存在超复合体（如III?+IV）。

突变体/处理条件下线粒体功能分析：适用于呼吸链缺陷突变体、胁迫处理或发育阶段特异性的线粒体功能研究。

储存与防腐剂定制

冻干及复溶后均建议于-20°C保存。如需在最终产品中添加ProClin防腐剂，可另行提出定制要求。

注意事项

1. 避免复溶后反复冻融，建议分装为单次使用量（如5–10 ul/管）。

2. 提取线粒体全程需保持低温（0–4°C），并添加蛋白酶抑制剂（如PMSF）以防止蛋白降解。

3. BN-PAGE中洋地黄皂苷的浓度需根据样本进行预实验优化，过度增溶会破坏呼吸链复合体天然构象。

总结

AS04 053A 抗体是一款针对植物COXII的高度保守多抗，具有跨多个进化枝的广泛反应性。其核心应用价值在于：

作为线粒体内膜区室标记物，辅助亚细胞定位研究；

与BN-PAGE联用，检测呼吸链复合体IV的组装状态及超分子结构；

通过WB检测，评估线粒体含量及氧化磷酸化活性变化。

实验成功的关键在于采用膜富集样本以及遵循BN-PAGE的特定去垢剂与凝胶条件。该抗体不适用于芒果和海带样本，请在选择物种时注意排除。如需详细操作流程或特殊物种验证，请参考完整产品说明书或联系技术支持团队。

部分引用文献：

D'Agostino et al. (2026). Heat stress-induced remodelling of lipid and microRNA networks in Brassica napus L. germinated pollen and pollen-derived small extracellular vesicles. J Exp Bot. 2026 Jun 23:erag303. doi: 10.1093/jxb/erag303.

Shi et al. (2025). Quantitative Analyses of Programmed Cell Death (PCD) Relevant Indicators in Postharvest Vegetable. Future Postharvest and Food. Doi.org/10.1002/fpf2.70027.

Sharma et al. (2025). Comprehensive endoplasmic reticulum proteomics analysis in chickpea (Cicer arietinum L.): unveiling cellular secrets. Journal of Proteins and Proteomics, doi.org/10.1007/s42485-025-00173-z