抗质膜H?ATP酶抗体（兔源）：高泛性植物质膜标记物方案

产品概述

由艾美捷代理Agrisera推出的抗质膜H?ATP酶抗体（兔源）（货号：AS07 260）是一款兔源多克隆抗体，免疫原为KLH偶联的合成多肽，其序列基于多种植物（包括双子叶、单子叶、蕨类、苔藓及藻类）质膜H?ATP酶的保守区域设计。涵盖拟南芥11个亚型（ATPase 1–11，详见产品信息）及莱茵衣藻氢ATP酶（UniProt Q9FNS3）。抗体经免疫原亲和纯化，以冻干形式提供于PBS pH 7.4缓冲体系中，每支规格为50 ug。推荐复溶体积为50 ul无菌水，复溶后浓度约为1 ug/ul。特别注意：本品严禁于4°C保存，冻干及复溶后均应于-20°C保存，复溶后请分装以避免反复冻融；开盖前需短暂离心。

分子量与识别特性

参数 | 数值

预期/表观分子量 | 90–95 kDa（拟南芥，视亚型而异）

细胞定位 | 质膜（专属区室标记物）

推荐应用与稀释比例

应用 | 推荐稀释度

免疫荧光（IF） | 1 : 600 – 1 : 1000

免疫定位（IL） | 1 : 100

蛋白质印迹（WB） | 1 : 1000 – 1 : 10000（起始推荐1:2000）

物种反应性详述

该抗体具有极为广泛的物种反应性，覆盖植物界多个进化分支，具体如下：

已验证反应性（代表性物种）：拟南芥、水稻、大麦、玉米、番茄、烟草、本氏烟草、大豆、豌豆、菠菜、向日葵、猕猴桃、茶树、荷花玉兰、地钱、小立碗藓、北美云杉、蜈蚣蕨（蕨类）、蓖麻、盐角草、矮牵牛、蝴蝶兰、蒺藜苜蓿、遏蓝菜、欧洲山杨、四爿藻、蚕豆等（完整列表见产品信息）。

预测反应性：燕麦、甜菜、陆地棉、马铃薯、高粱、小麦、酿酒酵母、海带属、小球藻属、冰叶日中花、盐藻、葡萄藻、玫瑰、格氏嗜盐碱藻、玉米黑粉菌等。

已确认无反应性：葱属、黑曲霉、克莱门氏柑橘、南极发草、小茴香、芒果姜、南极地杨梅、白羽扇豆、巴戟天、四爿藻（注：四爿藻同时出现在验证反应性与无反应性列表中，建议以实验验证为准）、葫芦巴、蚕豆。

蛋白背景与功能定位

质膜H?ATP酶（P-ATP酶超家族）是一类分子量约100 kDa的整合膜蛋白，特异性地存在于植物和真菌的质膜中。其核心功能是通过水解ATP将质子泵出胞外，建立跨膜的质子电化学梯度（ΔuH?），该梯度：

为次级转运蛋白（如营养物同向转运体）提供驱动力；

调控胞内pH稳态；

参与气孔运动、细胞伸长、叶片运动等环境响应过程。

该蛋白家族在拟南芥中至少包含11个成员（AHA1–AHA11），不同亚型在组织表达丰度和调控模式上存在差异。

实验关键限制与操作要点（必读）

本抗体在应用中有若干严格限制，直接影响实验结果，需特别注意：

1. 样品加热温度限制（极其重要）：切勿将样品加热至70°C以上，否则H?ATP酶将发生不可逆聚集沉淀，导致Western blot无信号。建议变性温度为65°C，处理5–10分钟，或室温裂解后直接上样（如使用非变性或温和变性缓冲液）。

2. 上样前离心：SDS-PAGE前需于室温下10,000 rpm离心1分钟，以去除样品中可能存在的蛋白聚集体，避免凝胶孔堵塞及条带拖尾。

3. 组织丰度差异：H?ATP酶在成熟根和成熟叶片中丰度较低，此类样本的检测可能需要使用高灵敏度的化学发光底物（如超敏ECL）或延长曝光时间。

4. 流式细胞术不适用：免疫原多肽长度为14个氨基酸，并非来源于胞外结构域，因此该抗体无法识别活细胞表面天然构象的表位，不适用于流式细胞术（FACS） 或活细胞染色。

5. 防腐剂定制：如需在配方中添加ProClin防腐剂，可另行提出要求。

Western blot 流程优化建议

提取缓冲液：建议使用含适量去垢剂（如Triton X-100或Tween-20）的提取液以充分溶解膜蛋白，同时添加蛋白酶抑制剂（如PMSF或cOmplete cocktail）。

凝胶浓度：推荐使用8%或10%分离胶，以清晰分辨约90–95 kDa的目的条带。

阳性对照：推荐使用拟南芥幼苗总膜蛋白或微粒体组分作为阳性对照。

内部参比：可搭配质膜标记物（如PIP1;1）或管家蛋白（如Actin）进行上样量校准。

免疫荧光/免疫定位注意事项

固定步骤中避免高温处理，建议使用4%多聚甲醛室温固定，并保持后续洗涤及封闭过程在常温或4°C进行。

因该抗体识别保守胞内表位，需对细胞/组织进行通透处理（如使用0.1% Triton X-100或Tween-20）以使抗体进入胞内结合靶标。

总结

AS07 260 抗体是一款覆盖度极广的植物质膜H?ATP酶检测工具，适用于拟南芥、水稻、番茄、蕨类、苔藓及多种藻类样本，兼具区室标记与功能蛋白研究双重价值。实验成功的关键在于严格遵守样品加热温度≤70°C、上样前离心去除聚集体，并根据组织丰度调整检测灵敏度。该抗体不适用于流式细胞术，请优先选择WB、IF或IL应用。建议针对特定物种优化抗原修复和封闭条件，以获得最佳信噪比。

部分引用文献：

Espanet et al. (2026). Clathrin adaptor EPSIN1 (EPS1) modulates plasma membrane abundance of PLEIOTROPIC DRUG RESISTANCE PDR9 for effective hormone homeostasis. Sci Adv . 2026 Feb 20;12(8):eadz2439. doi: 10.1126/sciadv.adz2439.

Wang et al. (2026). A hydrophobic core in the coiled-coil domain is essential for NRC resistosome function. New Phytol. 2026 Mar 29. doi: 10.1111/nph.71120.

Piechowiak et al. (2025), Ozone Treatment Enhances Antioxidant Status and Energy Metabolism in Radish (Raphanus sativus) Sprouts. Springer Nature, Food Bioprocess Technology.