抗BAK1抗体--高亲和力纯化多抗，适用于免疫沉淀与蛋白印迹

产品概述

由艾美捷代理Agrisera推出的抗BAK1（油菜素内酯不敏感1相关受体激酶1）（货号：AS12 1858）是一款兔源多克隆抗体，免疫原为KLH偶联多肽，该多肽序列选自拟南芥（*Arabidopsis thaliana*）BAK1蛋白（TAIR: AT4G33430，UniProt: Q94F62）。抗体经免疫原亲和纯化，以冻干形式提供于PBS pH 7.4缓冲体系中，每支规格为50 ug。推荐复溶体积为50 ul无菌水，复溶后浓度约为1 ug/ul。建议分装保存于-20°C，避免反复冻融；开盖前请短暂离心，以防管壁或管盖附着的样本损失。

分子量与识别特性

参数 | 数值

理论分子量 | 68 kDa

表观分子量（WB） | 约70 kDa

特异性 | 识别AtBAK1-Myc融合蛋白，不与AtSOBIR发生交叉反应

推荐应用与稀释比例

应用 | 推荐用量/稀释度

免疫沉淀（IP） | 每50 ul Protein G琼脂糖凝胶使用2 ?l 抗体

蛋白质印迹（WB） | 1 : 5000（起始稀释度）

物种反应性详述

反应类型 | 物种

已验证反应性 | 拟南芥（*Arabidopsis thaliana*）、番茄（*Solanum lycopersicum*）

预测反应性 | 盐芥（*Thellungiella halophila*）

确认无反应性 | 大麦、莴苣、本氏烟草、水稻

蛋白背景与功能定位

BAK1（BRI1相关受体激酶1，亦称SERK3/ATSERK3/ELG）是植物细胞膜定位的富亮氨酸重复受体激酶，具有双重功能：

生长发育：作为油菜素内酯受体BRI1的共受体，调控植物生长；

免疫信号：在无病原体或激发子条件下，BAK1仍可调控先天性免疫相关基因表达；

细胞死亡：参与程序性细胞死亡（PCD）调控。

该蛋白可被磷酸化修饰，其活性状态受磷酸化水平调控。

提取缓冲液配方与实验要点

针对BAK1等膜蛋白和磷酸化蛋白的提取，技术说明中提供了CE提取缓冲液的关键配置建议，直接关系到WB和IP实验结果的可重复性：

1. 缓冲液稳定性：CE缓冲液无需每次现配，可分装保存于-20°C备用，简化实验流程。

2. 磷酸酶抑制剂：需添加Na2MoO4和NaF，以防止目标蛋白在提取过程中去磷酸化，确保磷酸化状态的真实反映。

3. 金属离子螯合剂：添加EDTA可螯合金属离子，抑制多种依赖金属离子的蛋白酶活性，保护蛋白完整性。

4. 蛋白酶抑制剂混合物：推荐使用Sigma P9599产品，按1:100稀释比例加入提取缓冲液，进一步抑制蛋白酶降解。

实验流程优化建议（IP-WB联用）

若同时进行IP和WB检测，建议：

IP捕获时：采用2 ?l抗体/50 ul Protein G琼脂糖的比例，4°C旋转孵育不少于2小时；

WB检测时：一抗以1:5000稀释（可在TBST中配制），4°C孵育过夜以获得最佳信噪比；

总提取物可直接用于WB检测，抗体识别内源BAK1及转基因标签蛋白（如AtBAK1-Myc）。

储存与防腐剂定制

冻干及复溶后均建议于-20°C保存。如需在最终产品中添加ProClin防腐剂（用于长期4°C保存），可另行提出定制要求。

常见问题与注意事项

1. 物种限制：本抗体在单子叶植物（大麦、水稻）及本氏烟草中无信号，不建议用于该类样本。

2. 交叉反应：与同家族蛋白AtSOBIR无交叉，特异性良好，但与其他SERK家族成员的潜在交叉需通过敲除/突变体验证。

3. 磷酸化检测：需严格使用含磷酸酶抑制剂的提取缓冲液，并注意样本处理全程低温操作。

总结

AS12 1858 抗体是针对拟南芥BAK1的高特异性亲和纯化工具，适用于免疫沉淀和蛋白质印迹检测。其明确的物种反应性边界和详尽的提取缓冲液配方建议，为研究植物免疫信号、油菜素内酯通路及程序性细胞死亡提供了可靠的技术支持。番茄中的已验证反应性进一步拓宽了其应用场景。遵循推荐的稀释比例和缓冲液配置方案，可有效提高实验数据的一致性和准确性。

部分引用文献：

Zhang et al. (2026). The RING-Type Ubiquitin Ligase XBAT35. 2 Positively Modulates Plant Immunity by Promoting FLS2 Protein Accumulation. Mol Plant Microbe Interact . 2026 Mar 3. doi: 10.1094/MPMI-02-26-0015-R.

Bierman et al. (2025). A RALF-brassinosteroid signaling circuit regulates Arabidopsis hypocotyl cell shape. Curr Biol. 2025 Sep 26:S0960-9822(25)01186-8. doi: 10.1016/j.cub.2025.09.016.

Lee et al. (2024). Reprogramming of flagellin receptor responses with surrogate ligands. Nat Commun. 2024 Nov 12;15(1):9811.doi: 10.1038/s41467-024-54271-5.