抗AtpB抗体（兔源）：泛F型ATP合酶检测工具，覆盖叶绿体、线粒体与细菌

产品概述

由艾美捷代理Agrisera推出的抗AtpB（ATP合酶β亚基）抗体（兔源）（货号：AS05 085）是一款兔源多克隆抗体，免疫原为KLH偶联的合成多肽，该多肽序列基于已公布的植物、藻类（叶绿体与线粒体来源）及细菌的F型ATP合酶β亚基保守区域设计，涵盖拟南芥叶绿体AtpB（P19366/AtCg00480）、线粒体AtpB-1（P83483/At5g08670），以及莱茵衣藻（P06541、A8IQU3）等参考序列。抗体以血清形式提供，经冻干处理，每支规格为50 ?l。推荐复溶体积为50 ul无菌水，复溶后即为原倍血清。建议分装保存于-20°C，避免反复冻融；开盖前需短暂离心。

分子量与识别特性

参数 | 数值/说明

预期表观分子量（拟南芥） | 53.9 kDa

预期表观分子量（菠菜） | 53.7 kDa

预期表观分子量（集胞藻PCC6803） | 51.7 kDa

细胞定位 | 叶绿体基质CF1复合体、线粒体基质F1复合体、细菌质膜

表位位置 | 位于β折叠片层，部分暴露于AtpB蛋白表面近端

该抗体可同时识别叶绿体CF1-ATP合酶β亚基、线粒体F1-ATP合酶β亚基，以及绝大多数已知细菌F型ATP合酶。免疫原多肽位于β折叠区域，该区域在F型ATP合酶中高度保守，赋予抗体极广的物种反应性。

推荐应用与稀释比例

应用 | 推荐稀释度

免疫荧光（IF） | 1 : 100

蓝色天然PAGE（BN-PAGE） | 1 : 5000

超微结构膨胀显微术（U-ExM） | 1 : 2500

蛋白质印迹（WB） | 1 : 2000 – 1 : 5000（起始推荐1:3000）

物种反应性：覆盖三域生命的泛用性

该抗体具有极为宽广的物种反应性，涵盖植物、藻类、细菌、真菌及动物组织，具体分类如下：

已验证植物/藻类：拟南芥、烟草、本氏烟草、水稻（根、叶、花粉）、玉米、大麦、高粱、大豆、番茄、菠菜、豌豆、棉花、油菜、刺槐、青萍、卷柏、金鱼藻、小球藻、莱茵衣藻、佐芬衣藻、绿球藻、微拟球藻、厚皮藻、三角褐指藻、四团藻等。

已验证细菌/真菌：蜡样芽孢杆菌、大肠杆菌、幽门螺杆菌、枯草芽孢杆菌（预测）、恶臭假单胞菌（预测）、酿酒酵母、栗褐链霉菌（预测）、集胞藻PCC6803（可作为内参）。

已验证动物组织：牛、鸡、猪、大鼠、鲑鱼、海豹、飞蝗。

预测反应性：多种蓝藻、拟南芥近缘种、葡萄、木薯、小麦、画眉草、多花黑麦草、大叶藻、烟草近缘种、鲍曼不动杆菌、艰难梭菌、鼠伤寒沙门氏菌等。

无反应性：古菌V型ATP合酶（系统进化上非F型，不识别）。

该抗体被明确推荐作为莱茵衣藻、集胞藻PCC6803及蜡样芽孢杆菌的Western blot上样内参（loading control）。

蛋白背景与功能定位

ATP合酶是生物能量代谢的核心酶复合物，催化ADP和无机磷酸合成ATP，利用跨膜离子梯度（质子或钠离子）储存的能量驱动反应。F型ATP合酶由膜内Fo亚复合体和膜外F1亚复合体组成：

β亚基（AtpB） 是F1头部的主要催化亚基，含有核苷酸结合位点，负责ATP的合成与水解。

在植物细胞中，AtpB由核基因（线粒体β亚基）和细胞器基因（叶绿体β亚基）分别编码，本抗体可同时识别这两种来源的蛋白。

实验应用要点与技术优势

1. 多功能应用支持：

BN-PAGE：采用洋地黄皂苷（digitonin）增溶（去垢剂:蛋白=4:1），每孔上样100 ?g蛋白于4.5%–16%梯度凝胶（厚2 mm），一抗1:5000稀释，可清晰检测完整F1-ATP合酶复合体及其亚复合体。

IF与U-ExM：适用于细胞水平及超分辨显微结构中的ATP合酶定位，为能量代谢器分布研究提供空间信息。

WB：推荐1:2000–1:5000起始稀释，在总蛋白中信号强且条带清晰。

2. 双区室识别优势：

该抗体在同一植物样本中可同时检测叶绿体和线粒体来源的AtpB，尤其适用于研究不同细胞器能量代谢的协同响应，或比较光合组织与非光合组织中ATP合酶的差异表达。

3. 跨物种内参适用性：

在光合模式生物（莱茵衣藻、集胞藻）及细菌（蜡样芽孢杆菌）中已验证可作为稳定内参，为缺乏传统管家蛋白（如Actin、Tubulin）的体系提供了可靠的归一化方案。

实验流程优化建议

样本制备：可根据下游应用选用总蛋白提取液、膜富集组分或细胞器分离组分。BN-PAGE需使用温和去垢剂（如洋地黄皂苷或月桂基麦芽糖新戊二醇）以维持复合体完整性。

SDS-PAGE凝胶浓度：建议使用10%或12%分离胶，目标条带清晰位于50–55 kDa区域。

阳性对照：推荐使用拟南芥幼苗总蛋白或菠菜叶总蛋白、大肠杆菌裂解液、分离的小鼠线粒体。

阴性对照：古菌提取物（已知无反应性）或预吸附抗体的上清。

储存与定制说明

冻干及复溶后均建议于-20°C保存。如需在最终产品中添加ProClin防腐剂，可另行提出定制要求。

注意事项

1. 该抗体为未纯化血清，背景可能高于亲和纯化产品，建议封闭步骤延长（室温1–2小时）并使用高灵敏度化学发光底物时适当缩短曝光时间。

2. 检测动物组织样本时，抗体已确认对多种脊椎动物和无脊椎动物有效，拓展了植物抗体在比较生物学中的使用边界。

总结

AS05 085 抗体是当前市面上覆盖范围最广的F型ATP合酶β亚基检测工具之一，其独特价值在于：

三域覆盖：植物（双区室）、藻类、细菌、真菌、动物通检；

四重应用：WB、BN-PAGE、IF、U-ExM，兼顾变性/天然检测与可视化；

内参功能：在光合微生物及部分细菌中可作为稳定上样对照；

进化保守表位：位于β折叠表面暴露区域，确保了跨物种识别的可靠性。

该抗体特别适用于能量代谢研究、细胞器标记、光合作用与呼吸作用比较分析，以及缺乏常规内参物种的蛋白定量工作。