ALPCO Chemerin ELISA, 96孔检测原理说明及注意事项

Chemerin，也称为tazarotene诱导基因2（TIG2）或视黄酸受体响应因子2（RARRES2），是一种由163个氨基酸组成的前体蛋白，包括一个20个氨基酸的N端信号肽。不活跃的循环前体Chemerin含有六个半胱氨酸残基，因此可能形成三个分子内二硫键（1）。

已在肝脏、肺、垂体、淋巴结、胃和脂肪组织中证实了前体Chemerin的表达（1, 2）。它已在血液、卵巢和肝癌患者的腹水以及关节炎患者的滑膜液中被检测到（1）。在脾脏、淋巴结、小肠、肺组织以及巨噬细胞和未成熟树突状细胞中发现了不同的受体（1, 3）。

前体Chemerin通过丝氨酸或半胱氨酸蛋白酶转化为其生物活性形式，分别产生活性蛋白的促炎或抗炎作用。Chemerin的蛋白水解裂解已由以下丝氨酸蛋白酶描述：胰蛋白酶、纤溶酶、弹性蛋白酶、组织蛋白酶G以及半胱氨酸蛋白酶组织蛋白酶S和钙蛋白酶（4-6）。

活性蛋白参与先天和适应性免疫反应，例如作为未成熟树突状细胞和巨噬细胞的强效趋化因子。它通过与其特异性受体结合影响细胞内信号传导。Chemerin的C末端结构域允许与受体ChemR23/CMKLR1结合，并通过诱导Ca2+内流和ERK1/2激活来引发促炎刺激。此外，Chemerin的N末端结构域与CCRL2受体结合，并允许将C末端结构域呈现给邻近细胞。在前体Chemerin和半胱氨酸蛋白酶裂解的情况下，产生的肽对ChemR23/CMKLR1受体具有抑制作用，因此具有抗炎效应。

最近，发现Chemerin在脂肪生成和脂肪细胞代谢中的重要性（2, 7）。Goralski等人在小鼠中证明，Chemerin及其受体（ChemR23）在内脏和皮下脂肪组织的脂肪细胞中表达。在脂肪细胞分化过程中，表达和分泌增加。在脂肪细胞的培养基中发现了16 kDa的活性Chemerin。Chemerin还影响脂肪细胞内的信号传导网络，例如，已证明其刺激MAPK p42/44（ERK1/2）磷酸化。此外，作者还展示了Chemerin对脂肪细胞基因表达的后分化效应。

基于这些结果，提出了Chemerin对代谢综合征和胰岛素抵抗的影响。研究表明，Chemerin在肥胖人类的脂肪组织中表达更高，并且能够损害肌肉细胞的胰岛素敏感性以及脂肪细胞中的胰岛素介导的脂肪分解和脂肪生成（8, 9）。已经表明Chemerin与炎症标志物和代谢综合征的成分（10, 11）以及肾功能（12）相关联。

Chemerin ELISA用于定量测定人血清和血浆样本中的总Chemerin。仅供研究使用。不用于诊断程序

作为ALPCO在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品Chemerin ELISA, 96孔。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

Chemerin ELISA, 96孔检测原理：

Chemerin ELISA是一种所谓的三明治检测。它利用两种针对这种蛋白质的特异性和高亲和力抗体。样品中的Chemerin与微量滴定板上固定的第一抗体结合。在接下来的步骤中，生物素化和链霉抗生物素蛋白过氧化物酶偶联的第二特异性抗Chemerin抗体依次与固定的Chemerin结合。在闭合底物反应中，颜色变化是高度特异性的反应，定量取决于样品的Chemerins水平。

警告和注意事项：

仅限研究使用。不用于诊断程序。

在开始检测前，完整且仔细地阅读说明书。使用随试剂盒提供的说明书的有效版本。确保理解所有内容。

温度会影响检测的吸光度读数。然而，样本的值不会受到影响。

注意：本试剂盒包含人和/或动物来源的材料。本试剂盒提供的对照血清的人血清来源已进行检测，结果对乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、丙型肝炎病毒（HCV）和人类免疫缺陷病毒1型和2型（HIV）抗体呈非反应性。没有已知的检测方法能完全保证没有传染性病原体的存在；因此，应将所有组分和样本视为潜在的传染性。

容器和未使用内容物的处置应按照联邦和当地的监管要求进行。

必须尽可能快地进行样本和试剂的移液，并在每个步骤中按照相同的顺序进行。对每个样本、对照和试剂使用单独的移液枪头，以避免交叉污染。仅对单一试剂使用储液槽。这一点特别适用于底物储液槽。使用储液槽分装之前用于偶联液的底物溶液可能会导致溶液变色。不要把试剂倒回瓶中，因为可能会发生试剂污染。彻底混合微孔板孔内的内容物，以确保良好的测试结果。不要重复使用微孔。不要让孔在检测过程中变干；在完成冲洗步骤后立即添加试剂。

标准曲线：

图1。具有3个多项式曲线拟合的标准曲线示例。

文献参考：

1. Wittamer V, Franssen JD, Vulcano M, Mirjolet JF, Le Poul E, Migeotte I, et al. Specificrecruitment of antigen-presenting cells by chemerin, a novel processed ligand from humaninflammatory fluids. J Exp Med 2003;198:977-85.

2. Bozaoglu K, Bolton K, McMillan J, Zimmet P, Jowett J, Collier G, et al. Chemerin is a noveladipokine associated with obesity and metabolic syndrome. Endocrinology 2007;148:4687-94.

3. Roh SG, Song SH, Choi KC, Katoh K, Wittamer V, Parmentier M, Sasaki S. Chemerin--a newadipokine that modulates adipogenesis via its own receptor. Biochem Biophys Res Commun2007;362:1013-8.

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

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