6-ROX 甘氨酸荧光参比液（用于PCR反应），消除孔间误差，提升数据重复性

一、产品概述

6-ROX 甘氨酸荧光参比液（25 ?M）是一种即用型液体试剂，主要用于实时荧光定量 PCR（qPCR）检测中的荧光信号归一化校正。6-ROX glycine *25 uM fluorescence reference solution for PCR reactions由艾美捷代理AAT Bioquest推出，货号：AAT-395。该产品在 6-ROX 染料的基础上通过甘氨酸修饰显著提升了稳定性，克服了 ROX 传统上易降解的固有缺陷，同时完整保留了与 6-ROX 一致的光谱特性。

二、产品基本信息

参数 | 数值

外观 | 深红色液体

分子量 | 591.65 Da

溶解性 | 溶于水

工作浓度 | 25 ?M

激发峰 | 578 nm

发射峰 | 604 nm

储存条件 | 冷冻（<-15°C），严格避光

有效期 | 收货后 12 个月

三、配方组成与稳定性优化

该产品为即用型溶液，基质配方如下：

组分 | 浓度/含量 | 作用

6-ROX 甘氨酸 | 25 ?M | 荧光参比染料

Tris | 20 mM（pH 8.4） | 缓冲体系

EDTA | 0.1 mM | 螯合金属离子，保护核酸

Tween? 20 | 0.01% | 非离子表面活性剂，减少吸附

稳定性突破：传统 6-ROX 在罗丹明家族中极不稳定，而该产品的甘氨酸修饰形式显著改善了这一短板——有效期从常规 6-ROX SE 的 6 个月延长至 12 个月，且以水溶性液体制剂形式提供，无需复溶，开盖即用，简化了操作流程并降低了因复溶操作引入的误差风险。

四、qPCR 参比原理

在 qPCR 实验中，不同反应孔之间因蒸发、加样体积差异或仪器光路偏差等因素，会导致荧光信号读数的孔间波动。6-ROX 甘氨酸作为被动参比染料（Passive Reference Dye），其自身荧光信号不参与靶标扩增检测，而是作为每个反应孔的内参信号。仪器通过计算“靶标荧光强度 / ROX 荧光强度”的比值，对每个孔进行独立校正，从而消除非生物学因素的干扰，使不同孔之间的 Ct 值更具可比性，显著提升数据精度。

五、操作注意事项

1. 使用前充分混匀，避免气泡产生

2. 按仪器厂商推荐的终浓度添加至 qPCR 反应体系中（不同品牌仪器对 ROX 浓度要求不同，需根据说明书调整）

3. 储存于 -15°C 以下，避免反复冻融；建议分装后单次使用

4. 操作过程中注意避光，防止光漂白

综上，6-ROX 甘氨酸荧光参比液以其即用型配方、延长的稳定性和完整保留的光谱特性，为 qPCR 实验提供了一种更可靠的信号校正解决方案，尤其适用于对数据重复性要求较高的高通量检测场景。

文献参考：

Four-color DNA sequencing by synthesis on a chip using photocleavable fluorescent nucleotides

Authors: Seo TS, Bai X, Kim DH, Meng Q, Shi S, Ruparel H, Li Z, Turro NJ, Ju J.

Journal: Proc Natl Acad Sci U S A (2005): 5926

Evaluation of surface-enhanced resonance Raman scattering for quantitative DNA analysis

Authors: Faulds K, Smith WE, Graham D.

Journal: Anal Chem (2004): 412

Photocleavable fluorescent nucleotides for DNA sequencing on a chip constructed by site-specific coupling chemistry

Authors: Seo TS, Bai X, Ruparel H, Li Z, Turro NJ, Ju J.

Journal: Proc Natl Acad Sci U S A (2004): 5488

Adsorption of oligonucleotides on PMMA/PNIPAM core-shell latexes: polarity of the PNIPAM shell probed by fluorescence

Authors: Prazeres TJ, Santos AM, Martinho JM, Elaissari A, Pichot C.

Journal: Langmuir (2004): 6834

Blue light-induced generation of reactive oxygen species in photoreceptor ellipsoids requires mitochondrial electron transport

Authors: Yang JH, Basinger SF, Gross RL, Wu SM.

Journal: Invest Ophthalmol Vis Sci (2003): 1312