山羊抗小鼠IgG2b重链抗体亲和纯化：即用型，配合二抗灵活构建检测系统

一、产品概述

小鼠IgG亚型分为IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c及IgG3等，其中IgG2b在结构上具有独特之处——其分子呈“T”形而非经典的“Y”形，这是由链内二硫键相互作用所致。本文介绍一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的针对小鼠IgG2b重链的特异性山羊多克隆抗体（货号：A90-109P）。该抗体经固相吸附和亲和纯化，以未标记完整IgG形式提供，适用于ELISA、免疫细胞化学（ICC）、免疫组织化学（IHC）和蛋白质印迹（WB）等应用。

二、核心规格参数

参数 详细信息

靶标 小鼠IgG2b重链

反应性 小鼠

应用 ELISA， ICC， IHC， WB

宿主 山羊

克隆性 多克隆

形式 完整IgG

亚型 IgG

标记 未偶联

纯度 抗原亲和纯化

抗原物种 小鼠

浓度 1 mg/ml

储存温度 2 – 8 °C

有效期 自收货之日起2年

缓冲液 含0.09%叠氮化钠的磷酸盐缓冲盐水

三、生产与纯化工艺

本抗体的生产采用固相吸附技术以确保亚类特异性。具体而言，抗血清经固相吸附处理，以去除与其他IgG亚类交叉反应的组分。随后通过亲和层析进行分离——将小鼠IgG2b抗原偶联至琼脂糖凝胶，抗体经过该亲和柱后获得高纯度产物。免疫球蛋白浓度的测定依据比尔定律：1 mg/ml IgG在280 nm波长处的吸光度为1.4。

四、特异性与交叉反应性

经免疫电泳和ELISA验证，本抗体与小鼠IgG2b发生特异性反应。与小鼠IgA、IgM、IgG1、IgG2a、IgG2c、IgG3及IgE的交叉反应性均低于1%，显示出极高的亚类特异性。

重要提示：部分杂交瘤克隆可能表达异常的免疫球蛋白相关肽段，这些异常产物可能被本抗体错误识别。使用者若检测杂交瘤上清或腹水样本，建议同时设置适当的阴性对照（如使用不相关的同型对照抗体或不表达IgG2b的亲本细胞系上清）以排除假阳性。

五、推荐应用与稀释度

以下稀释度范围供参考。请注意，并非所有列出的应用均经过实验室的专门验证，使用者需根据具体实验条件进行优化。

酶联免疫吸附测定（ELISA）

常规检测：1:1,000 – 1:30,000

包被酶标板：1:100 – 1:500

在ELISA中，本抗体可作为捕获抗体（包被）或检测抗体（标记二抗后使用）。由于产品为未偶联形式，用于检测时需配合合适的酶标或荧光标记的二抗（如兔抗山羊IgG-HRP）。

免疫细胞化学（ICC）

推荐稀释度：1:200 – 1:2,000

适用于培养细胞的固定和通透处理后的染色。建议使用含0.1% Triton X-100和适量正常血清的缓冲液进行封闭，以降低背景。

免疫组织化学（IHC）

推荐稀释度：1:200 – 1:2,000

适用于冷冻切片或石蜡切片。对于福尔马林固定、石蜡包埋组织，建议根据组织类型优化抗原修复条件（如枸橼酸盐缓冲液pH 6.0或Tris-EDTA pH 9.0）。

蛋白质印迹（WB）

推荐稀释度：1:1,000 – 1:30,000

适用于还原或非还原条件下的SDS-PAGE。由于本抗体识别的是重链，在还原条件下可检测到约55 kDa的条带（小鼠IgG2b重链）；在非还原条件下检测到的信号对应于完整IgG2b（约150 kDa）。建议设置阳性对照——纯化的小鼠IgG2b蛋白或已知表达IgG2b的杂交瘤细胞裂解液。

六、储存与稳定性

抗体应在2°C至8°C条件下储存，切勿冷冻。反复冻融会导致抗体变性聚集，降低效价。自收货之日起，在推荐的储存条件下有效期为2年。缓冲液中含有0.09%的叠氮化钠作为防腐剂。

注意事项：

叠氮化钠会抑制过氧化物酶活性。若计划将本抗体用于HRP标记二抗的检测体系（如WB或ELISA中作为一抗使用后再加HRP标记的二抗），一般无需去除叠氮化钠，因为本抗体本身不含HRP，且实验中会经过多次洗涤。但若计划将本抗体直接进行HRP标记，则需通过透析或脱盐去除叠氮化钠。

叠氮化钠对细胞具有毒性，不适用于活细胞染色。