兔抗Matrin 3抗体亲和纯化，避免与核纤层等核基质交叉反应，确保核斑点染色特异

一、产品概述

Matrin 3是一种核基质蛋白，参与多种细胞过程：将缺陷RNA锚定于核基质从而滞留于核内、调控与核骨架/核基质附着区（MAR/SAR）邻近基因的启动子活性，同时也是NMDA受体激活后神经元细胞死亡通路中的主要PKA底物。本文介绍一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的针对人Matrin 3蛋白C端区域（第800至847位氨基酸）的兔多克隆抗体（货号：A300-591A）。该抗体经抗原亲和纯化，以未标记完整IgG形式提供，浓度200 ?g/ml，适用于免疫组织化学（IHC）、免疫组织化学-免疫荧光（IHC-IF）、免疫沉淀（IP）和蛋白质印迹（WB）检测，反应性涵盖人及小鼠样本。

二、核心规格参数

参数 | 详细信息

靶标 | Matrin 3

反应性 | 人，小鼠

应用 | IHC， IHC-IF， IP， WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 完整IgG

免疫原 | 第797位至C端（全长847位）

亚型 | IgG

标记 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原物种 | 人

浓度 | 200 ?g/ml

| 储存温度 | 2 – 8 °C |

有效期 | 自收货之日起1年

缓冲液 | Tris缓冲盐水，含0.1% BSA及0.09%叠氮化钠

三、免疫原与表位定位

本抗体的免疫原对应人Matrin 3蛋白（UniProt ID: P43243）第797位至C端（第847位）之间的区域，具体表位位于第800位残基与C端之间。参考序列登录号为NP_061322.2，对应GeneID 9782。该C端区域在Matrin 3蛋白中相对独特，与其他核基质蛋白（如核纤层蛋白、NuMA等）的同源性较低，因此本抗体能够特异识别Matrin 3全长蛋白，同时避免与核内其他结构蛋白发生交叉反应。

四、生产与亲和纯化工艺

抗体采用固相载体上固定的Matrin 3特异性C端表位进行亲和纯化。将包含上述C端表位的重组肽段或合成多肽偶联至亲和基质，兔抗血清经该亲和柱层析，获得高纯度、高特异性的多克隆抗体。免疫球蛋白浓度依据比尔定律测定：1 mg/ml IgG在280 nm波长处的吸光度为1.4。纯化后抗体浓度为200 ?g/ml，保存在含0.1% BSA（作为稳定剂）和0.09%叠氮化钠（防腐剂）的Tris缓冲盐水中。

五、储存与稳定性

抗体应在2°C至8°C条件下储存，切勿冷冻。自收货之日起，在推荐的储存条件下有效期为1年。缓冲液中含有的0.1% BSA有助于防止抗体在低浓度下吸附于管壁，提高长期稳定性。叠氮化钠的存在可能抑制过氧化物酶活性，若计划将本抗体用于HRP标记二抗的检测体系（如WB或IHC中的信号放大），一般无需去除，因为实验中会经过多次洗涤；但若计划对本抗体进行直接HRP标记，则需通过透析或脱盐去除叠氮化钠。

六、应用指南与优化参数

以下稀释度和操作条件基于产品验证数据提供。所有蛋白质印迹实验均需使用含5%脱脂奶粉的TBST作为封闭液及抗体稀释液，一抗孵育条件为4°C过夜。对于免疫沉淀后WB检测，需特别注意二抗选择。

免疫组织化学（IHC）

推荐稀释度：1:500 – 1:2,000

关键操作要点：

对于福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片，必须进行抗原修复。

推荐使用枸橼酸盐缓冲液（pH 6.0）进行热诱导抗原修复。可采用微波炉加热至沸腾后维持10-15分钟，或使用高压锅修复2-3分钟。

修复后需自然冷却至室温，再用PBS洗涤，然后进行封闭（建议使用5%正常山羊血清或BSA）。

由于抗体未直接标记，需配合HRP或荧光标记的抗兔二抗进行检测。

建议：初次使用本抗体进行IHC时，可从1:500稀释度开始，根据信号强度和背景情况向上调整（最高至1:2,000）。设置已知阳性组织（如人脑、脊髓或多种癌细胞系异种移植瘤）作为阳性对照，并省略一抗作为阴性对照。

免疫组织化学-免疫荧光（IHC-IF）

推荐稀释度：1:250 – 1:1,000

操作要点：

IHC-IF与IHC的差异在于检测方式：使用荧光标记的抗兔二抗（如Alexa Fluor 488/594），避免使用DAB等显色底物。

抗原修复条件同IHC（枸橼酸盐缓冲液pH 6.0）。

封闭后加入一抗（4°C过夜），洗涤后加入对应荧光二抗（室温避光孵育1小时）。

最后使用含DAPI的封片剂进行核染色。

Matrin 3为核基质蛋白，预期在细胞核内呈网状或点状分布。

免疫沉淀（IP）

推荐用量：6 ?g 抗体 / mg 细胞裂解物总蛋白

操作流程要点：

1. 制备细胞裂解液（推荐使用含蛋白酶抑制剂的非变性裂解缓冲液，如RIPA或NP-40缓冲液，但RIPA可能破坏某些蛋白相互作用，可尝试温和裂解液）。

2. 取1 mg总蛋白裂解液，加入6 ?g本抗体。

3. 4°C旋转孵育过夜。

4. 加入蛋白A琼脂糖或磁珠（兔特异性介质），继续孵育2-4小时。

5. 用裂解液洗涤沉淀复合物3-5次。

6. 加入SDS-PAGE上样缓冲液（含还原剂），煮沸5分钟洗脱。

7. 洗脱产物进行WB检测时，需使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体（而非识别重链的二抗），以避免免疫沉淀中抗体重链（约55 kDa）与Matrin 3（约95 kDa）信号重叠。

重要提示：在IP后WB检测的封闭缓冲液中，建议添加5%正常猪血清（货号S100-020），以进一步降低背景信号。

蛋白质印迹（WB）

推荐稀释度：1:1,000 – 1:5,000

通用操作条件：

封闭液及抗体稀释液：5%脱脂奶粉-TBST（含0.1% Tween-20的TBS）。

一抗孵育：4°C过夜（推荐）或室温2小时。

二抗使用：

细胞裂解液WB：使用常规山羊抗兔IgG（识别重链和轻链，货号A120-101P）。

免疫沉淀后WB：必须使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，并在封闭液中添加5%正常猪血清，以消除IP过程中抗体重链的干扰信号。

检测：化学发光（ECL）检测。

蛋白大小：Matrin 3的表观分子量约为95-100 kDa。建议同时上样阳性对照裂解液（如HeLa、293T、Neuro2a或小鼠脑组织裂解液）以及预染分子量标记。在还原条件下，Matrin 3迁移速度略慢于100 kDa标记。