兔抗MOF/MYST1抗体亲和纯化，DNA损伤应答关键工具研究

一、产品概述

MOF（又称MYST1或KAT8）是MYST家族组蛋白乙酰转移酶的核心成员，特异性催化组蛋白H4第16位赖氨酸（H4K16）的乙酰化修饰，并在DNA损伤应答中与ATM激酶相互作用。本文介绍一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的针对人MOF蛋白N端区域（第1至50位氨基酸）的兔多克隆抗体（货号：A300-992A）。该抗体经抗原亲和纯化，以未标记完整IgG形式提供，适用于免疫组织化学（IHC）、免疫沉淀（IP）和蛋白质印迹（WB）检测，反应性涵盖人及小鼠样本。

二、核心规格参数

参数 | 详细信息

靶标 | MOF / MYST1 / KAT8

反应性 | 人，小鼠

应用 | IHC， IP， WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 完整IgG

免疫原 | 第1至50位氨基酸

亚型 | IgG

标记 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原物种 | 人

浓度 | 1000 ?g/ml

储存温度 | 2 – 8 °C

有效期 | 自收货之日起1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸/磷酸盐缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮化钠

三、免疫原与表位定位

本抗体的免疫原对应人MOF/MYST1蛋白（UniProt ID: Q9H7Z6）第1至50位氨基酸之间的N端区域。参考序列登录号为BAB13924.1，对应GeneID 84148（基因符号KAT8）。该N端区域在不同物种中相对保守，且不同于MYST家族其他成员（如TIP60、MOZ）的C端催化结构域，因此本抗体能够特异识别MOF全长蛋白，同时避免与家族内其他乙酰转移酶发生交叉反应。

四、生产与亲和纯化工艺

抗体采用固相载体上固定的MOF特异性N端表位进行亲和纯化。具体而言，将包含上述第1-50位氨基酸的重组肽段或合成多肽偶联至亲和基质，兔抗血清经该亲和柱层析，获得高纯度、高特异性的多克隆抗体。免疫球蛋白浓度依据比尔定律测定：1 mg/ml IgG在280 nm波长处的吸光度为1.4。纯化后的抗体保存在Tris-柠檬酸/磷酸盐缓冲液（pH 7-8）中，并添加0.09%叠氮化钠作为防腐剂。

五、储存与稳定性

抗体应在2°C至8°C条件下储存，切勿冷冻。自收货之日起，在推荐的储存条件下有效期为1年。缓冲液中的叠氮化钠可能会抑制过氧化物酶标记检测体系，若计划将本抗体用于HRP偶联二抗的检测系统（如WB或IHC中的信号放大），建议通过透析或脱盐步骤去除叠氮化钠，或选择与叠氮化钠兼容的检测试剂。

六、应用指南与优化参数

以下稀释度和操作条件基于产品验证数据提供。所有蛋白质印迹实验均需使用含5%脱脂奶粉的TBST作为封闭液及抗体稀释液，一抗孵育条件为4°C过夜。对于不同实验类型，需注意二抗的选择差异。

免疫组织化学（IHC）

推荐稀释度：1:1,000 – 1:5,000

关键操作要点：

对于福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片，必须进行抗原修复。

推荐使用Tris-EDTA缓冲液（pH 9.0）进行热诱导抗原修复。可采用微波炉加热至沸腾后维持10-20分钟，或使用高压锅修复2-5分钟。

修复后需自然冷却至室温，再用PBS洗涤，然后进行封闭和一抗孵育。

由于抗体未直接标记，需配合HRP或荧光标记的抗兔二抗进行检测。

建议：初次使用本抗体进行IHC时，可从1:1,000稀释度开始，根据信号强度和背景情况向上调整（最高至1:5,000）。设置已知阳性组织（如人睾丸、HeLa细胞异种移植瘤或小鼠脑组织）作为阳性对照，并省略一抗作为阴性对照。

免疫沉淀（IP）

推荐用量：6 ?g 抗体 / mg 细胞裂解物总蛋白

操作流程要点：

1. 制备细胞裂解液（推荐使用非变性裂解缓冲液，如含蛋白酶抑制剂的RIPA或NP-40缓冲液）。

2. 取1 mg总蛋白裂解液，加入6 ?g本抗体。

3. 4°C旋转孵育过夜，确保抗原-抗体充分结合。

4. 加入蛋白A琼脂糖或磁珠（根据抗体宿主选择兔特异性结合介质），继续孵育2-4小时。

5. 洗涤沉淀复合物3-5次后，加入SDS-PAGE上样缓冲液煮沸洗脱。

6. 洗脱产物进行WB检测时，需使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体（而非识别重链的二抗），以避免免疫沉淀中抗体重链（约55 kDa）与MOF（约60 kDa）信号重叠。

重要提示：在IP后WB检测的封闭缓冲液中，建议添加5%正常猪血清（货号S100-020），以进一步降低背景信号。