兔抗BAF57/SMARCE1抗体亲和纯化，轻链特异性二抗匹配，精准检测

一、产品概述

BAF57（又称SMARCE1）是SWI/SNF染色质重塑复合物的核心亚基，在雌激素受体介导的基因转录共激活中发挥关键作用。本文介绍一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的针对人BAF57/SMARCE1蛋白C端区域（第361至411位氨基酸）的兔多克隆抗体（货号：A300-810A）。该抗体经抗原亲和纯化，以未标记完整IgG形式提供，适用于免疫组织化学（IHC）、免疫沉淀（IP）和蛋白质印迹（WB）检测，反应性涵盖人及小鼠样本。

二、核心规格参数 

参数 | 详细信息

靶标 | BAF57 / SMARCE1

反应性 | 人，小鼠

应用 | IHC， IP， WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 完整IgG

免疫原 | 第361位至C端（全长411位）

亚型 | IgG

标记 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原物种 | 人

浓度 | 1000 ?g/ml

储存温度 | 2 – 8 °C

有效期 | 自收货之日起1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸/磷酸盐缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮化钠

三、免疫原与表位定位

本抗体的免疫原对应人BAF57/SMARCE1蛋白（UniProt ID: Q969G3）第361位至C端（第411位）之间的区域，具体表位位于第360位残基与C端之间。参考序列登录号为NP_003070.3，对应GeneID 6605。该C端区域在BAF57蛋白中相对保守，且不同于与其他SWI/SNF亚基相互作用的N端结构域，因此本抗体能够特异识别BAF57全长蛋白，同时避免与复合物中其他组分发生交叉反应。

四、生产与亲和纯化工艺

抗体采用固相载体上固定的BAF57特异性表位进行亲和纯化。具体而言，将包含上述C端表位的抗原肽段偶联至亲和基质，兔抗血清经该亲和柱层析，获得高纯度、高特异性的多克隆抗体。免疫球蛋白浓度依据比尔定律测定：1 mg/ml IgG在280 nm波长处的吸光度为1.4。纯化后的抗体保存在Tris-柠檬酸/磷酸盐缓冲液（pH 7-8）中，并添加0.09%叠氮化钠作为防腐剂。

五、储存与稳定性

抗体应在2°C至8°C条件下储存，切勿冷冻。自收货之日起，在推荐的储存条件下有效期为1年。缓冲液中的叠氮化钠可能会抑制过氧化物酶标记检测体系，若计划将本抗体用于HRP偶联二抗的检测系统（如WB或IHC中的信号放大），建议通过透析或脱盐步骤去除叠氮化钠，或选择与叠氮化钠兼容的检测试剂。

六、应用指南与优化参数

以下稀释度和操作条件基于产品验证数据提供。所有蛋白质印迹实验均需使用含5%脱脂奶粉的TBST作为封闭液及抗体稀释液，一抗孵育条件为4°C过夜。对于不同实验类型，需注意二抗的选择差异。

免疫组织化学（IHC）

推荐稀释度：1:500 – 1:2,000

关键操作要点：

对于福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片，必须进行抗原修复。

推荐使用枸橼酸盐缓冲液（pH 6.0）进行热诱导抗原修复，可采用微波炉或高压锅加热。

修复后需自然冷却至室温，再进行封闭和一抗孵育。

由于抗体未直接标记，需配合HRP或荧光标记的抗兔二抗进行检测。

建议：初次使用本抗体进行IHC时，可从1:500稀释度开始，根据信号强度和背景情况向上调整（最高至1:2,000）。设置已知阳性组织（如人乳腺癌或睾丸组织）作为阳性对照，并省略一抗作为阴性对照。

免疫沉淀（IP）

推荐用量：6 ?g 抗体 / mg 细胞裂解物总蛋白

操作流程要点：

1. 制备细胞裂解液（推荐使用非变性裂解缓冲液，如含蛋白酶抑制剂的RIPA或NP-40缓冲液）。

2. 取1 mg总蛋白裂解液，加入6 ?g本抗体。

3. 4°C旋转孵育过夜，确保抗原-抗体充分结合。

4. 加入蛋白A/G琼脂糖或磁珠，继续孵育2-4小时。

5. 洗涤沉淀复合物3-5次后，加入SDS-PAGE上样缓冲液煮沸洗脱。

6. 洗脱产物进行WB检测时，需使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体（而非识别重链的二抗），以避免免疫沉淀中抗体重链（约55 kDa）与BAF57（约57 kDa）信号重叠。

重要提示：在IP后WB检测的封闭缓冲液中，建议添加5%正常猪血清（货号S100-020），以进一步降低背景信号。

蛋白质印迹（WB）

推荐稀释度：1:2,000 – 1:10,000

通用操作条件：

封闭液及抗体稀释液：5%脱脂奶粉-TBST（含0.1% Tween-20的TBS）。

一抗孵育：4°C过夜（推荐）或室温2小时。

二抗：推荐使用山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（货号A120-101P）。

检测：化学发光或显色法均可。

样本类型区分：

细胞裂解液WB：使用常规抗兔IgG二抗（识别重链和轻链）。

免疫沉淀后WB：必须使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，并在封闭液中添加5%正常猪血清，以消除IP过程中抗体重链的干扰信号。

蛋白大小：BAF57的表观分子量约为57 kDa。建议同时上样阳性对照裂解液（如HeLa或293T细胞裂解液）以及分子量标记。