山羊抗小鼠IgM重链抗体亲和纯化，可作捕获抗体或检测抗体

产品概述

免疫球蛋白M（IgM）是机体在免疫应答中首先产生的抗体类别，在血清中含量较高，对早期抗感染防御至关重要。本文介绍的是由艾美捷Bethyl Laboratories推出的一款山羊抗小鼠IgM重链特异性抗体（货号：A90-101P），经固相吸附和亲和层析纯化，适用于ELISA、免疫细胞化学（ICC）、免疫组织化学（IHC）和免疫印迹（WB）等多种检测体系。

基本规格

抗体类型：山羊多克隆IgG，完整IgG形式，未偶联。

特异性：针对小鼠IgM重链。通过免疫电泳和ELISA验证，该抗体特异识别小鼠IgM，与小鼠IgG亚类及IgA的交叉反应可忽略不计。注意：本品可能与其他物种的IgM存在交叉反应，用户需根据实验体系验证。

纯化方式：抗血清经固相吸附确保类别特异性，再通过抗原偶联琼脂糖珠进行亲和层析分离。该策略有效去除了与轻链或其他Ig类别反应的抗体。

浓度：1 mg/ml（测定方法：比尔定律，1 mg/mL IgG在A280nm处吸光度为 1.4）。

缓冲体系：磷酸盐缓冲液（PBS），含0.09%叠氮化钠作为防腐剂。

储存与稳定性：2-8°C保存，自收货之日起稳定期2年。

推荐应用与条件

重要提示：以下部分应用未经过我方实验室直接验证，所列稀释比为文献报道或用户反馈的参考范围，建议用户自行优化。

1. 酶联免疫吸附测定（ELISA）

稀释范围：

检测或二抗用途：1:1,000 至 1:30,000

包被酶标板（作为捕获抗体）：1:100 至 1:500

适用场景：定量或半定量检测小鼠IgM水平，可作为夹心ELISA的检测抗体或直接包被抗体。

2. 免疫印迹（Western Blot，WB）

稀释范围：1:1,000 至 1:30,000

适用样本：小鼠血清、细胞培养上清、B细胞裂解液或免疫沉淀后的样本。由于IgM以五聚体形式存在（分子量约900 kDa），还原条件下可观察到约75 kDa的重链条带。

3. 免疫组织化学（IHC）与免疫细胞化学（ICC）

稀释范围：1:200 至 1:2,000

适用样本：

IHC：小鼠组织冰冻切片或石蜡切片（需优化抗原修复条件）

ICC：培养的B细胞、浆细胞或转染细胞

检测建议：未偶联抗体需配合合适的标记二抗（如HRP、荧光染料或生物素标记的抗山羊IgG）进行信号放大。

产品附加信息

重链特异性抗体的设计原理

常规抗Ig抗体可能同时识别重链和轻链。由于轻链在其他Ig类别（IgG、IgA、IgE）中广泛存在，此类抗体无法区分Ig类型。本抗体通过以下设计实现重链特异性：

固相吸附：抗血清经过与其他小鼠Ig类别（如IgG、IgA）的结合位点吸附，去除交叉反应性。

亲和纯化：使用小鼠IgM重链偶联的琼脂糖珠特异性富集抗重链抗体，而非完整IgM分子，从而避免轻链反应性。

这一设计确保抗体优先识别IgM特有的重链恒定区表位。

应用选择指南

应用 | 推荐稀释比 | 关键注意事项

ELISA（检测） | 1:1000-1:30000 | 配合酶标抗山羊二抗使用

ELISA（包被） | 1:100-1:500 | 直接包被于高结合力板

WB | 1:1000-1:30000 | 还原条件检测~75 kDa重链

IHC/ICC | 1:200-1:2000 | 需进行封闭和亲和素/生物素阻断（如适用）

与其他物种的交叉反应

产品说明指出“可能与其他物种的IgM存在交叉反应”。如计划检测非小鼠样本（如大鼠、人、兔等），建议设置适当的阴性对照和阳性对照进行验证。可以通过预吸附或使用物种特异性封闭试剂降低背景。

技术建议与注意事项

叠氮化钠的影响

缓冲液中含有0.09%叠氮化钠。若后续实验涉及：

HRP检测系统：叠氮化物会抑制HRP活性。在使用HRP标记二抗前，需通过充分洗涤（3次×5分钟）去除叠氮化物。

细胞培养：叠氮化钠对细胞有毒。若需将抗体加入活细胞培养体系，应使用不含叠氮化物的制剂。

长期储存：叠氮化物可防止微生物污染，适合2-8°C保存。但如需进行标记（如生物素或荧光标记），建议先通过脱盐或透析去除叠氮化物。

稀释与保存建议

稀释液：推荐使用含1% BSA或正常血清的PBS稀释，以降低非特异性吸附。

工作液稳定性：稀释后抗体建议现用现配，不宜长时间存放。

冻融：本品未经过反复冻融验证，建议分装保存于2-8°C，避免冷冻以防蛋白聚集。

特定应用的优化提示

Western Blot：

由于IgM五聚体在非还原条件下难以进入凝胶，务必使用还原条件（含DTT或β-巯基乙醇的样品缓冲液）并煮沸变性。

建议使用PVDF膜而非硝酸纤维素膜，因PVDF对大分子量蛋白结合力更高。

转膜条件：湿转系统建议使用含0.02% SDS的转移缓冲液，300 mA恒流转膜2小时（对于900 kDa五聚体，需延长转膜时间或降低凝胶浓度）。

免疫组织化学：

对于石蜡切片，可能需要进行抗原修复。推荐使用柠檬酸缓冲液（pH 6.0）或Tris-EDTA缓冲液（pH 9.0）进行热修复。

内源性过氧化物酶阻断：若使用HRP检测系统，需用3% H?O?孵育10-15分钟。

背景控制：加入与二抗同源的正常血清（如正常兔血清）进行封闭。

ELISA：

包被抗体稀释液推荐使用碳酸盐缓冲液（pH 9.6）以实现最佳吸附。

检测灵敏度可通过生物素-链霉亲和素系统放大信号。