兔抗Sin1抗体亲和纯化，同步支持IHC、IP、WB，覆盖细胞定位与互作分析

产品概述

Sin1（应力激活MAP激酶相互作用蛋白1，又称MAPKAP1）是mTORC2复合物的核心亚基，作为PDK2负责磷酸化Akt/PKB的Ser473位点，在细胞生长、代谢和存活调控中发挥关键作用。本文介绍的由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔抗Sin1抗体，亲和纯化（货号：A300-910A）是一款兔源多克隆抗体，特异性识别Sin1蛋白，适用于免疫组织化学（IHC）、免疫沉淀（IP）和免疫印迹（WB）等多种应用。

基本规格

抗体类型：兔多克隆IgG，完整IgG形式，未偶联。

免疫原：对应人Sin1蛋白（应力激活MAP激酶相互作用蛋白1）第472位至C末端（第522位氨基酸）区域，参考序列NP_001006618.1（GeneID 79109）。具体表位位于第470位至C端之间。

纯化方式：抗原亲和纯化——将特异性表位固定于固相载体，富集高特异性抗体。

浓度：1000 ?g/ml（测定方法：比尔定律，1 mg/mL IgG在A280nm处吸光度为1.4）。

缓冲体系：Tris-柠檬酸/磷酸缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮化钠作为防腐剂。

储存与稳定性：2-8°C保存，自收货之日起稳定期1年。

反应种属与特异性

已验证反应种属：人（Human）。抗体识别表位位于Sin1蛋白第472位至C末端区域。建议用户根据实验需求验证其他种属的交叉反应性。

推荐应用与实验条件

1. 免疫印迹（Western Blot，WB）

推荐稀释比：1:2,000 至 1:10,000

通用WB操作要点：

封闭液和抗体稀释液：5%脱脂牛奶-TBST

一抗孵育：过夜（O/N）

二抗选择：

细胞裂解液样本：使用山羊抗兔IgG（重链+轻链）抗体（如A120-101P）

免疫沉淀后样本：需使用HRP标记的抗兔IgG轻链特异性二抗，并在封闭缓冲液中添加5%正常猪血清（如S100-020），以避免重链干扰

2. 免疫沉淀（IP）

用量：每毫克细胞裂解液蛋白使用6 ?g抗体

适用样本：人源细胞或组织裂解液

注意事项：Sin1作为mTORC2复合物组分，IP时建议使用温和裂解条件（如含CHAPS或NP-40的缓冲液）以维持蛋白复合物的完整性。

3. 免疫组织化学（IHC）

推荐稀释比：1:1,000 至 1:5,000

抗原修复：对于福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织切片，强烈推荐使用pH 6.0的柠檬酸缓冲液进行热诱导抗原修复。

适用样本：人源组织切片

Sin1（MAPKAP1）的生物学功能

Sin1（Gene Symbol: MAPKAP1，Gene ID: 79109，UniProt ID: Q9BPZ7）也被称为TORC2亚基MAPKAP1，具有以下核心功能：

mTORC2复合物中的关键作用：

Sin1是mTORC2（雷帕霉素不敏感性复合物）的必需亚基，与rictor、mTOR、mLST8和Protor共同组成该复合物。

作为PDK2（磷脂酰肌醇依赖性蛋白激酶2），Sin1介导Akt/PKB在Ser473位点的磷酸化。该磷酸化是Akt完全活化的关键事件，对细胞存活、增殖和代谢调控至关重要。

Sin1通过结合rictor来维持mTORC2复合物的稳定性，缺失Sin1将导致mTORC2组装失败。

应激信号通路中的支架蛋白功能：

在细胞核中，Sin1可作为ATF-2与p38 MAPK之间的支架蛋白，促进p38诱导的ATF-2磷酸化，参与应激应答。

Sin1也与c-Jun N端激酶（JNK）形成复合物，类似地作为支架蛋白调节JNK信号通路。

该蛋白最初被鉴定为SAPK（应力激活蛋白激酶）相互作用蛋白，参与酵母SIN1同源物介导的应力应答。

其他别名：JC310、MEKK2相互作用蛋白1（MIP1）、mSIN1、Ras抑制剂MGC2745、SIN1b、SIN1g等。

IP后WB的检测要点

进行免疫沉淀后的Western blot检测时，必须使用抗兔IgG轻链特异性HRP二抗（并添加5%正常猪血清）。这是因为IP过程中抗体的重链（约50 kDa）和轻链（约25 kDa）会随目标蛋白一同被洗脱和变性。Sin1的分子量约为59 kDa（依据亚型不同有所差异），该区域可能与抗体重链信号重叠。使用轻链特异性二抗可有效避免这一问题。正常猪血清有助于降低非特异性背景。

亚型识别

Sin1存在多种亚型（如SIN1b、SIN1g），分子量略有差异（约55-60 kDa）。本抗体识别C末端区域（第472-522位），理论上可识别包含该表位的所有主要亚型。若在WB中观察到多条条带，可能对应于不同亚型或翻译后修饰形式。