兔抗Leo1抗体亲和纯化，助力表观遗传与RNA加工研究

产品概述

Leo1（RNA聚合酶相关蛋白LEO1）是PAF1/RNA聚合酶II复合物的核心组分，参与转录起始、延伸、组蛋白甲基化及RNA加工等多个关键环节。本文介绍的由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔抗Leo1抗体亲和纯化（货号：A300-175A）是一款兔源多克隆抗体，特异性识别Leo1蛋白，适用于免疫组织化学（IHC）、免疫沉淀（IP）和免疫印迹（WB）等应用，反应种属包括小鼠和人。

基本规格

抗体类型：兔多克隆IgG，完整IgG形式，未偶联。

免疫原：对应人Leo1蛋白（衰老下调leo1样蛋白）第550至600位氨基酸残基区间，参考TrEMBL条目Q8WVC0（GeneID 123169）。

纯化方式：抗原亲和纯化——将特异性表位固定于固相载体，富集高特异性抗体。

浓度：1000 ?g/ml（测定方法：比尔定律，1 mg/mL IgG在A280nm处吸光度为1.4）。

缓冲体系：Tris-柠檬酸/磷酸缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮化钠作为防腐剂。

储存与稳定性：2-8°C保存，自收货之日起稳定期1年。

反应种属与特异性

已验证反应种属：小鼠（Mouse）和人（Human）。抗体识别表位位于Leo1蛋白第550-600区域（C端附近）。建议用户根据实验需求验证其他种属（如大鼠、猴等）的交叉反应性。

推荐应用与实验条件

1. 免疫印迹（Western Blot，WB）

推荐稀释比：1:10,000 至 1:25,000

通用WB操作要点：

封闭液和抗体稀释液：5%脱脂牛奶-TBST

一抗孵育：过夜（O/N）

二抗选择：

细胞裂解液样本：使用山羊抗兔IgG（重链+轻链）抗体（如A120-101P）

免疫沉淀后样本：需使用HRP标记的抗兔IgG轻链特异性二抗，并在封闭缓冲液中添加5%正常猪血清（如S100-020），以避免重链干扰

预期条带：Leo1的分子量约为70-80 kDa（具体因亚型和修饰而异）。

2. 免疫沉淀（IP）

用量：每毫克细胞裂解液蛋白使用6 ?g抗体

适用样本：人或小鼠细胞裂解液

注意事项：Leo1作为PAF1复合物组分，IP时建议使用温和裂解条件（如含NP-40或CHAPS的缓冲液）以维持蛋白复合物的完整性。可结合CDC73、PAF1或CTR9抗体的共沉淀实验验证复合物相互作用。

3. 免疫组织化学（IHC）

推荐稀释比：1:2,000 至 1:10,000

抗原修复：对于福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织切片，强烈推荐使用Tris-EDTA缓冲液（pH 9.0）进行热诱导抗原修复。

适用样本：人或小鼠组织切片

Leo1（LEO1）的生物学功能

Leo1（Gene Symbol: LEO1，Gene ID: 123169，UniProt ID: Q8WVC0）也称为RNA聚合酶相关蛋白LEO1，是PAF1/RNA聚合酶II复合物的关键组分。

PAF1复合物的组成：

该复合物在真核生物中高度保守，至少包含以下核心亚基：Leo1、CDC73、PAF1和CTR9。部分物种中还包含其他辅助亚基。

主要功能：

转录调控：PAF1复合物与RNA聚合酶II直接结合，在转录起始和延伸阶段发挥调控作用。它促进RNA聚合酶II从启动子区域向基因编码区的有效过渡。

组蛋白修饰：该复合物参与介导多种组蛋白修饰，包括H3K4甲基化、H3K36甲基化以及H2B单泛素化，这些修饰与转录延伸和染色质结构动态变化密切相关。

RNA加工：PAF1复合物还参与共转录RNA加工事件，包括mRNA加帽、剪接和多聚腺苷酸化。

衰老相关性：Leo1最初被鉴定为复制性衰老下调基因（RDL，replicative senescence down-regulated），其表达水平在细胞衰老过程中降低，提示其在细胞增殖和衰老调控中具有潜在作用。

其他别名：RDL、复制性衰老下调leo1样蛋白。

技术建议与注意事项

稀释优化

WB推荐的1:10,000-1:25,000为极宽的稀释范围，反映出该抗体对Leo1的高亲和力。建议从1:10,000开始进行梯度稀释测试，根据信号强度和背景优化最佳工作浓度。高稀释比有助于降低非特异性条带。

IHC抗原修复条件

本抗体与常规IHC修复条件（柠檬酸缓冲液pH 6.0）不同，专门推荐使用Tris-EDTA缓冲液（pH 9.0）。操作要点：

修复液：10 mM Tris碱，1 mM EDTA，0.05% Tween 20，pH 9.0

修复方式：微波炉高火煮沸后转低火15-20分钟，或使用高压锅修复2-3分钟

冷却：室温自然冷却20-30分钟，然后用PBS洗涤

使用错误修复液可能导致信号减弱或背景增高。