兔抗Pumilio 2抗体亲和纯化，高效翻译调控研究工具

产品概述

Pumilio 2（PUM2）是一种生殖细胞特异性RNA结合蛋白，通过识别靶mRNA的3’非翻译区（3’ UTR）元件实现翻译调控，在生殖细胞维持和发育中发挥关键作用。本文介绍的由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔抗Pumilio 2抗体亲和纯化（货号：A300-202A）是一款兔源多克隆抗体，特异性识别Pumilio 2蛋白，适用于免疫沉淀（IP）和免疫印迹（WB）应用，反应种属包括小鼠和人。

基本规格

抗体类型：兔多克隆IgG，完整IgG形式，未偶联。

免疫原：对应人Pumilio 2蛋白第100至150位氨基酸残基区间，参考序列NP_056132.1（GeneID 23369）。

纯化方式：抗原亲和纯化——将特异性表位固定于固相载体，富集高特异性抗体。

浓度：1000 ?g/ml（测定方法：比尔定律，1 mg/mL IgG在A280nm处吸光度为1.4）。

缓冲体系：Tris-柠檬酸/磷酸缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮化钠作为防腐剂。

储存与稳定性：2-8°C保存，自收货之日起稳定期1年。

反应种属与特异性

已验证反应种属：小鼠（Mouse）和人（Human）。抗体识别表位位于Pumilio 2蛋白第100-150区域（N端附近）。Pumilio 2与Pumilio 1具有高度同源性，建议用户根据实验需求验证是否存在交叉反应，可通过敲除/敲低样本或肽阻断实验确认。

推荐应用与实验条件

1. 免疫印迹（Western Blot，WB）

推荐稀释比：1:1,000 至 1:2,000

通用WB操作要点：

封闭液和抗体稀释液：5%脱脂牛奶-TBST

一抗孵育：过夜（O/N）

二抗选择：

细胞裂解液样本：使用山羊抗兔IgG（重链+轻链）抗体（如A120-101P）

免疫沉淀后样本：需使用HRP标记的抗兔IgG轻链特异性二抗，并在封闭缓冲液中添加5%正常猪血清（如S100-020），以避免重链干扰

预期条带：Pumilio 2的分子量约为120 kDa（具体因亚型和翻译后修饰而异）。由于Pumilio 2在生殖细胞中高表达，在体细胞中表达水平较低，建议使用睾丸、卵巢或生殖细胞系（如GC-1、GC-2）裂解液作为阳性对照。

2. 免疫沉淀（IP）

用量：每毫克细胞裂解液蛋白使用6 ?g抗体

适用样本：人或小鼠细胞或组织裂解液（推荐使用生殖组织或生殖细胞系）

注意事项：Pumilio 2作为RNA结合蛋白，其与靶mRNA的相互作用依赖于RNA。若研究蛋白-蛋白互作，建议添加RNase抑制剂（如RNase OUT）或进行RNase处理以区分RNA介导的间接结合。若研究RNA结合功能，需使用RNA免疫沉淀（RIP）或CLIP-seq实验体系，此抗体未经RIP验证，用户需自行优化。

Pumilio 2（PUM2）的生物学功能

Pumilio 2（Gene Symbol: PUM2，Gene ID: 23369，UniProt ID: Q8TB72）也称为Pumilio同源物2，是进化上高度保守的PUF家族RNA结合蛋白成员。

主要功能：

翻译调控：Pumilio 2通过其C端RNA结合结构域特异性识别靶mRNA 3’ UTR中的Pumilio响应元件（PRE，通常为UGUANAUA），抑制翻译或促进mRNA降解。

生殖细胞维持：Pumilio 2在生殖细胞中特异性高表达，与同源蛋白Pumilio 1共同参与原始生殖细胞的形成、自我更新和分化。敲除Pumilio 2的小鼠表现为生殖细胞发育异常。

蛋白相互作用：Pumilio 2已被证明与DAZL（生殖细胞发育必需的RNA结合蛋白）相互作用，协同调控生殖细胞中特定mRNA的翻译。此外，Pumilio 2也可能与CNOT复合物（CCR4-NOT去腺苷酸化酶复合物）相互作用，介导mRNA降解。

表达特征：Pumilio 2在成年小鼠的睾丸、卵巢中高表达，在胚胎生殖细胞中亦可检测到。在体细胞中表达水平极低或不表达。因此，选择适当的阳性对照是实验成功的关键。

其他别名：PUMH2、pumilio-2、PUML2。

样本制备注意事项

裂解液配方：RIPA缓冲液（50 mM Tris pH 7.5，150 mM NaCl，1% NP-40，0.5%脱氧胆酸钠，0.1% SDS）适用于WB和IP。若需保留RNA结合，使用不含SDS的NP-40裂解液，并添加RNase抑制剂（40 U/ml）。

蛋白酶抑制：Pumilio 2易受蛋白酶降解，务必在裂解液中添加新鲜蛋白酶抑制剂混合物（如PMSF、亮肽素、抑肽素）。

样本保存：裂解液建议分装后-80°C保存，避免反复冻融。

总结

A300-202A是一款抗原亲和纯化的兔抗Pumilio 2多克隆抗体，浓度为1000 ?g/ml，适用于小鼠和人源样本的IP和WB检测。其识别表位位于Pumilio 2蛋白第100-150区域。WB推荐稀释比为1:1,000-1:2,000，建议使用睾丸或生殖细胞系裂解液作为阳性对照；IP推荐用量为6 ?g/mg裂解液。抗体储存于含叠氮化钠的Tris-柠檬酸/磷酸缓冲液（pH 7-8）中，2-8°C下可稳定保存一年。该抗体是研究生殖细胞发育、RNA翻译调控以及Pumilio-DAZL信号轴的重要工具。用户在IP后WB检测时应使用轻链特异性二抗并添加猪血清封闭，以优化信号质量。对于RIP等RNA相关应用，需自行验证抗体兼容性并添加RNase抑制剂。