山羊抗人κ轻链抗体亲和纯化，亲和层析纯化抗κ轻链抗体，多物种交叉潜力

产品核心信息

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的抗人Kappa轻链抗体（货号：A80-115P）是一款以山羊为宿主制备的多克隆抗体，经抗原亲和纯化获得高纯度Whole IgG。该抗体特异性识别所有人免疫球蛋白中的Kappa轻链，适用于ELISA、免疫细胞化学（ICC）、免疫组化（IHC）及免疫印迹（WB）检测。主要规格参数如下：

参数 详细信息

靶点 人Kappa轻链

反应性 人

宿主 山羊

克隆性 多克隆

格式 Whole IgG

浓度 1 mg/ml

纯化方式 抗原亲和纯化（琼脂糖珠偶联抗原）

同种型 IgG

偶联物 未偶联

缓冲液 PBS，含0.09%叠氮化钠

储存 2 - 8°C

有效期 2年（自收货之日起）

免疫原与特异性

该抗体通过亲和层析技术纯化，使用固定于琼脂糖珠上的人Kappa轻链作为配基。抗体浓度采用比尔定律测定，以1 mg/ml IgG在A280吸光度1.4为标准。

特异性验证（经免疫电泳和ELISA确认）：

特异性识别所有人免疫球蛋白中的Kappa轻链

与Lambda轻链无交叉反应

与非免疫球蛋白血清蛋白无交叉反应

可能与其他物种的Kappa轻链发生交叉反应（未经系统验证）

技术优势：该抗体的纯化策略确保了Kappa轻链表位的完整保留，同时去除了针对其他血清蛋白或Lambda轻链的非特异性抗体。作为多克隆抗体，其可识别Kappa轻链上的多个抗原表位，因此在不同实验体系中均表现出高灵敏度和宽动态范围。

储存与稳定性

储存条件：2 - 8°C。请勿冷冻，冷冻会导致蛋白变性和效价下降。

有效期：自收货之日起2年，在推荐的储存条件下保持稳定。

缓冲液体系：磷酸盐缓冲盐水（PBS），含0.09%叠氮化钠作为防腐剂。使用前无需稀释，直接按推荐比例加入实验体系。

应用范围与推荐参数

该抗体在ELISA、ICC、IHC及WB四种主要应用中均表现良好。注意：部分应用未经实验室逐一验证，建议用户初次使用时进行梯度优化。

应用 推荐稀释比 特殊说明

ELISA 检测：1:1000 - 1:30,000<br>包被：1:100 - 1:500 作为检测抗体时，推荐使用高稀释比（1:5000-1:20000）；作为包被抗体时，使用较低稀释比（1:100-1:500）。

免疫细胞化学（ICC） 1:200 - 1:2000 可用于检测细胞表面或胞内Kappa轻链。固定和通透条件需根据细胞类型优化。

免疫组化（IHC） 1:200 - 1:2000 适用于福尔马林固定、石蜡包埋组织切片。推荐进行抗原修复（枸橼酸盐缓冲液pH 6.0或Tris-EDTA pH 9.0）。

免疫印迹（WB） 1:1000 - 1:30,000 还原或非还原条件下均可使用。注意Kappa轻链在还原SDS-PAGE中迁移至约25 kDa。

详细实验建议

ELISA：

作为检测抗体：将抗体稀释于含0.1% BSA和0.05% Tween-20的PBS中，室温孵育1-2小时。推荐起始稀释比1:5000，根据信号强度向上或向下调整。

作为包被抗体：用碳酸盐缓冲液（pH 9.6）稀释至1-5 ?g/ml，4°C过夜包被。本抗体1 mg/ml浓度，1:500稀释即为2 ?g/ml。

免疫印迹（WB）：

Kappa轻链在非还原条件下以与重链结合的形式存在（约150 kDa），在还原条件下（含β-巯基乙醇或DTT）则解离为约25 kDa的游离轻链。用户应根据实验目的选择还原或非还原电泳条件。

推荐使用5% Milk-TBST封闭，一抗稀释于封闭液中，4°C孵育过夜。起始稀释比1:5000。

阳性对照：人IgG（还原处理后）或多发性骨髓瘤患者血清。

免疫组化（IHC）：

可用于检测组织切片中表达Kappa轻链的浆细胞。推荐使用石蜡包埋的扁桃体或淋巴组织切片作为阳性对照。

抗原修复：建议使用枸橼酸盐缓冲液（pH 6.0）微波加热15-20分钟，或使用压力锅加热5分钟。

一抗稀释于含1% BSA的PBS中，4°C孵育过夜，起始稀释比1:500。

检测系统推荐使用HRP/AP标记的兔抗山羊二抗，配合DAB或AEC显色。

免疫细胞化学（ICC）：

用于培养细胞（如B淋巴细胞或浆细胞系）中Kappa轻链的定位。细胞可用4%甲醛固定10-15分钟，0.1% Triton X-100通透5分钟。

一抗稀释比1:500-1:1000，4°C孵育过夜。荧光标记的二抗（如Alexa Fluor 488兔抗山羊IgG）适用于共聚焦显微成像。

使用注意事项

1. 防腐剂：缓冲液含0.09%叠氮化钠，具毒性。操作时需佩戴手套和护目镜，避免皮肤接触。叠氮化钠会抑制HRP活性，若用于HRP检测系统（如WB、ELISA、IHC中的HRP二抗），需确保在封闭和洗涤步骤中充分去除（增加洗涤次数）。也可考虑换用不含叠氮化钠的缓冲液重新稀释抗体。

2. 冻融限制：该抗体应始终储存于2-8°C，不可冷冻。冷冻会导致抗体聚集和活性丧失。如已冷冻，不建议使用。

3. 稀释液匹配：不同实验体系推荐的稀释液不同：

WB/ELISA检测：推荐使用5% Milk-TBST或含1% BSA的PBS-T。

IHC/ICC：推荐使用含1-2%正常血清（来自二抗宿主，如兔或马）和0.1% BSA的PBS。

4. 阳性对照设置：

WB：还原处理的人IgG标准品，或多发性骨髓瘤患者血清/尿液。

IHC：人扁桃体组织切片（生发中心浆细胞强阳性）。

ICC：人浆细胞系（如U266、RPMI-8226）。

5. 阴性对照：

使用同型对照山羊IgG（非特异性）。

使用仅加二抗的空白对照。

使用已知Lambda轻链阳性的样本验证特异性。

6. 交叉反应验证：如需检测小鼠或其它物种样本，建议通过WB预先验证。可同时使用该抗体和物种特异性Kappa轻链抗体进行平行比较。