驴抗山羊IgG（H+L）HRP偶联物，信号放大能力提升2倍，不漏检任何类别的山羊一抗

一、产品概述

在免疫检测实验中，酶标记的二抗是实现信号放大的关键工具。本文介绍一款驴抗山羊IgG（重链和轻链）多克隆抗体，其已与辣根过氧化物酶（HRP）共价偶联，可直接用于检测山羊来源的一抗。由艾美捷Bethyl Laboratories推出的该抗体（货号：A50-101P）经抗原亲和纯化，以完整IgG形式提供，浓度1 mg/ml，适用于ELISA、免疫细胞化学（ICC）、免疫组织化学（IHC）和蛋白质印迹（WB）等多种应用。其识别山羊IgG的重链和轻链，即能够结合完整IgG分子的所有部分，具有更高的检测灵敏度，但需注意可能存在一定程度的种属交叉反应。

二、核心规格参数

参数 | 详细信息

靶标 | 山羊IgG重链和轻链

反应性 | 山羊

应用 | ELISA， ICC， IHC， WB

宿主 | 驴

克隆性 | 多克隆

形式 | 完整IgG

亚型 | IgG

标记 | 辣根过氧化物酶（HRP）

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原物种 | 山羊

浓度 | 1 mg/ml

储存温度 | 2 – 8 °C

有效期 | 自收货之日起1年

缓冲液 | 含0.05% Pro-Clean 400的磷酸盐缓冲盐水

三、生产与标记工艺

本抗体采用亲和层析技术进行纯化：将山羊IgG抗原偶联至琼脂糖凝胶，驴抗血清经过该亲和柱后，高特异性的抗山羊IgG抗体被吸附，随后洗脱收集。纯化后的抗体与辣根过氧化物酶进行共价偶联。偶联前，免疫球蛋白浓度依据比尔定律测定（1 mg/ml IgG在280 nm的吸光度为1.4）。酶与抗体的摩尔比为4:1，即每个抗体分子平均连接4个HRP分子。这一标记比例既保证了较高的酶活性，又避免了过度标记导致的抗体结合能力下降。纯化后抗体保存在含0.05% Pro-Clean 400（一种防腐剂，不含叠氮化钠，对HRP活性无抑制）的磷酸盐缓冲盐水中。

四、特异性与交叉反应性

经免疫电泳和ELISA验证，本抗体与山羊IgG及与其他山羊免疫球蛋白共同的轻链发生特异性反应。未检测到针对非免疫球蛋白血清蛋白的抗体，表明纯化质量高。

需要注意：

由于本抗体识别轻链（κ和λ），而轻链存在于所有类型的免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM、IgE等）中，因此该抗体不仅能检测山羊IgG，也可能检测其他山羊免疫球蛋白亚型。这在大多数实验中是可接受的，甚至有助于检测总免疫球蛋白。本抗体可能与其他物种的IgG发生交叉反应，尤其亲缘关系较近的物种（如绵羊、牛等）。使用者应根据样本来源评估背景信号，必要时设置适当的阴性对照。

五、储存与稳定性

抗体应在2°C至8°C条件下储存，切勿冷冻。冷冻会导致HRP失活及抗体聚集。自收货之日起，在推荐的储存条件下有效期为1年。缓冲液中不含叠氮化钠（Pro-Clean 400替代），因此不会抑制HRP活性，可直接用于需要酶活性的检测体系。

六、应用指南与优化参数

以下稀释度范围供参考。请注意，并非所有列出的应用均经过实验室的专门验证，使用者需根据具体实验条件进行优化。

酶联免疫吸附测定（ELISA）

推荐稀释度：1:10,000 – 1:100,000

操作要点：

本抗体可作为检测抗体，用于间接ELISA中检测已结合的山羊一抗。

稀释液推荐使用含0.05% Tween-20和1% BSA或脱脂奶粉的PBS。

显色底物：TMB（3,3‘,5,5’-四甲基联苯胺）或OPD（邻苯二胺）。加入底物后避光孵育15-30分钟，用终止液（如2M H2SO4）终止反应，读取450 nm或492 nm吸光度。

高稀释度优势：起始稀释度高达1:10,000，可有效降低背景，节省抗体用量。

免疫组织化学（IHC）

推荐稀释度：1:50 – 1:500

适用样本：

福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片

新鲜冷冻组织切片

固定或未固定的细胞爬片

操作要点：

1. 脱蜡、水化（FFPE切片）后，进行抗原修复（根据一抗要求选择枸橼酸盐缓冲液pH 6.0或Tris-EDTA pH 9.0）。

2. 使用3% H2O2孵育10-15分钟，以灭活内源性过氧化物酶。

3. 封闭：使用5%正常驴血清或5% BSA封闭非特异性位点。

4. 孵育山羊来源的一抗（按一抗推荐条件）。

5. 洗涤后，加入本抗体（按推荐稀释度，通常1:100-1:500），室温孵育30-60分钟。

6. 洗涤后，加入DAB显色液，显微镜下控制显色时间。

7. 复染、脱水、封片。

建议：初次使用可从1:200开始，根据信号强度和背景调整。