兔抗GST标签抗体亲和纯化，增强溶解性标签专用抗体

一、产品概述

谷胱甘肽S-转移酶（GST）标签是一种常用的蛋白融合标签，因其对谷胱甘肽的高度亲和力而广泛应用于重组蛋白的亲和纯化。GST标签的分子量较大（约26 kDa），与许多小分子标签（如His、FLAG、HA等）相比，具有提高融合蛋白溶解性的独特优势。此外，GST标签可通过蛋白酶切割去除，灵活性高。本文介绍一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的针对日本血吸虫（Schistosoma japonicum）来源GST标签的兔多克隆抗体（货号：A190-122A）。该抗体经抗原亲和纯化，以未标记完整IgG形式提供，浓度1 mg/ml，适用于ELISA、免疫细胞化学（ICC）、免疫沉淀（IP）和蛋白质印迹（WB）检测，可识别GST标签融合蛋白。

二、核心规格参数

参数 | 详细信息

靶标 | GST标签（日本血吸虫来源）

应用 | ELISA， ICC， IP， WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 完整IgG

亚型 | IgG

标记 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

浓度 | 1 mg/ml

储存温度 | 2 – 8 °C

有效期 | 自收货之日起1年

缓冲液 | 含0.09%叠氮化钠的磷酸盐缓冲盐水

三、免疫原与生产

本抗体通过免疫兔产生，免疫原为日本血吸虫来源的谷胱甘肽S-转移酶（GST）。由于GST标签在多种商品化表达载体（如pGEX系列）中广泛使用，该抗体可识别绝大多数GST融合蛋白。抗体采用亲和层析纯化：将GST蛋白偶联至固相载体，兔抗血清经过亲和柱后，高特异性的抗GST抗体被吸附，随后洗脱收集。免疫球蛋白浓度依据比尔定律测定：1 mg/ml IgG在280 nm波长处的吸光度为1.4。纯化后抗体保存在含0.09%叠氮化钠的PBS中。

四、储存与稳定性

抗体应在2°C至8°C条件下储存，切勿冷冻。自收货之日起，在推荐的储存条件下有效期为1年。缓冲液中的叠氮化钠会抑制过氧化物酶活性，若计划将本抗体用于HRP标记二抗的检测体系（常规WB/IHC），一般无需处理，因为实验中会经过多次洗涤；但如果计划对本抗体进行直接HRP标记，需通过透析或脱盐去除叠氮化钠。

五、应用指南与优化参数

以下稀释度和操作条件基于产品验证数据提供。所有蛋白质印迹实验均使用含5%脱脂奶粉的TBST作为封闭液及抗体稀释液，一抗孵育条件为4°C过夜。对于不同实验类型，需注意样本性质及二抗选择。

酶联免疫吸附测定（ELISA）

推荐稀释度：

常规检测（作为一抗）：1:1,000 – 1:30,000

包被酶标板（作为捕获抗体）：1:100 – 1:500

操作要点：

本抗体可用于检测经GST标签纯化或直接包被的GST融合蛋白。

由于抗体未标记，需配合HRP标记的抗兔二抗进行检测。

推荐使用含0.05% Tween-20和1% BSA的PBS作为稀释液和洗涤液。

免疫细胞化学（ICC）

推荐稀释度：1:100 – 1:400

操作要点：

适用于表达GST融合蛋白的细胞（如转染后的哺乳动物细胞或细菌涂片）。

细胞固定（4%多聚甲醛）和通透（0.1% Triton X-100）后，使用5%正常山羊血清封闭。

一抗稀释至工作浓度，4°C孵育过夜。

洗涤后加入荧光或HRP标记的抗兔二抗进行检测。

GST标签较大（~26 kDa），可能影响融合蛋白的亚细胞定位，建议同时使用标签特异性抗体和目的蛋白抗体进行共定位验证。

免疫沉淀（IP）

推荐用量：1 – 4 ?g 抗体 / mg 细胞裂解物总蛋白

操作流程：

1. 制备表达GST融合蛋白的细胞裂解液（建议使用非变性裂解缓冲液，以保持GST标签的天然构象）。

2. 取1 mg总蛋白裂解液，加入1-4 ?g本抗体（具体用量取决于融合蛋白的表达丰度，初次实验可从2 ?g开始）。

3. 4°C旋转孵育过夜。

4. 加入蛋白A琼脂糖或磁珠，继续孵育2-4小时。

5. 用裂解液洗涤沉淀复合物3-5次。

6. 加入含还原剂的SDS-PAGE上样缓冲液，煮沸洗脱。

7. 洗脱产物进行WB检测时，建议使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体（并在封闭液中添加5%正常猪血清），以避免免疫沉淀中抗体重链（~55 kDa）与目标融合蛋白信号重叠。如果目标融合蛋白分子量远大于55 kDa（如大于70 kDa），也可使用常规抗兔二抗。

蛋白质印迹（WB）

推荐稀释度：1:1,000 – 1:30,000

通用操作条件：

封闭液及抗体稀释液：5%脱脂奶粉-TBST（含0.1% Tween-20的TBS）。

一抗孵育：4°C过夜。

二抗：使用常规山羊抗兔IgG（识别重链和轻链，货号A120-101P）。

检测：ECL化学发光。

蛋白大小：GST标签本身约26 kDa。融合蛋白的预期分子量 = 目的蛋白分子量 + 26 kDa。建议使用阳性对照——纯化的GST蛋白或已知表达的GST融合蛋白裂解液。

注意：GST融合蛋白在SDS-PAGE中有时会出现降解产物或二聚体，抗体可能检测到多条带。建议使用新鲜制备的裂解液并添加蛋白酶抑制剂。