兔抗ARA70抗体亲和纯化，核受体共激活与铁自噬研究利器

产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的ARA70抗体（货号A302-272A）是一种兔源多克隆抗体，特异性靶向人源雄激素受体相关蛋白70（Androgen Receptor-Associated Protein 70，ARA70），即核受体共激活因子4（NCOA4）。该抗体以全IgG形式提供，浓度为1000 ?g/ml，经抗原亲和纯化，未偶联标记物，适用于免疫沉淀（IP）和Western Blot（WB）检测。

免疫原与特异性

本抗体的免疫原对应人源ARA70蛋白第564至614位氨基酸残基之间的区域（接近C末端），参考序列号为NP_005428.1（GeneID 8031）。通过表位特异性亲和纯化工艺，将针对ARA70固定化表位的抗体从抗血清中分离纯化，确保高特异性识别目标抗原。

技术参数

参数 | 详细信息

靶标 | ARA70 (NCOA4，核受体共激活因子4)

反应性 | 人

应用 | 免疫沉淀（IP）、Western Blot（WB）

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

免疫原 | 第564位–C末端之间（具体为564-614位）

同型 | IgG

偶联物 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原种属 | 人

浓度 | 1000 ?g/ml

储存条件 | 2–8 °C

保质期 | 收货后1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸/磷酸缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮化钠

浓度测定方法

免疫球蛋白浓度采用比尔定律测定，其中1 mg/ml IgG在280 nm波长下的吸光度（A280）为1.4。

Western Blot实验方案

推荐稀释度

1:2,000 – 1:10,000

实验条件

封闭及稀释液：5%脱脂牛奶-TBST

一抗孵育：过夜孵育（4°C）

二抗（细胞裂解液WB）：山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（货号A120-101P）

二抗（免疫沉淀物WB）：使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，并在封闭缓冲液中加入5%正常猪血清（货号S100-020），以消除膜上IgG重链的干扰信号。

免疫沉淀实验方案

推荐用量：6 ?g抗体/mg细胞裂解物

靶点背景信息

蛋白功能

ARA70最初是在RET原癌基因的染色体易位中作为融合伙伴被发现的。随后，在酵母双杂交筛选中被鉴定为雄激素受体（AR）的配体依赖性相关因子。除作为AR的共激活因子外，ARA70还被发现能够作为维生素D受体、雌激素受体、PPARα和PPARγ的共激活因子，参与多种核受体信号通路的调控。

ARA70（NCOA4）在细胞中主要参与以下过程：

核受体转录激活：通过与核受体的配体结合域相互作用，增强受体介导的基因转录。

铁代谢调控：ARA70被确认为铁蛋白自噬（ferritinophagy）的关键调节因子，介导铁蛋白（ferritin）的选择性自噬降解，释放细胞内储存的铁离子，维持铁稳态。

DNA损伤修复：近年来研究发现ARA70参与同源重组修复过程。

别称

70 kDa androgen receptor coactivator、70 kDa AR-activator、Androgen receptor coactivator 70 kDa protein、androgen receptor-associated protein of 70 kDa、ARA70、ELE1、NCoA-4、nuclear receptor coactivator 4、PTC3、ret fused、RET-activating gene ELE1、Ret-activating protein ELE1、RFG

产品优势与功能特点

1. 高浓度配方（1000 ?g/ml）：相比同类产品（通常200 ?g/ml），本抗体提供更高的母液浓度，灵活性更强。宽WB稀释范围（1:2,000–1:10,000）允许用户根据目标蛋白丰度进行调节，特别是在检测低表达水平的ARA70时，可降低稀释倍数而不牺牲抗体用量。

2. 双重应用验证：同时适用于免疫沉淀和Western Blot检测，IP推荐用量明确（6 ?g/mg裂解物），用户无需自行摸索，可快速建立实验体系。

3. 高特异性亲和纯化：采用针对ARA70第564–614位表位的固相亲和纯化，有效去除非特异性血清成分，降低背景信号，尤其适用于IP富集后的WB检测，提高信噪比。

4. 稳定储存配方：Tris-柠檬酸/磷酸缓冲液（pH 7–8）维持稳定的酸碱环境，0.09%叠氮化钠作为防腐剂。2–8°C下可稳定保存1年，无需冷冻，避免反复冻融导致的抗体聚集和活性下降。

5. IP-WB联用优化设计：本抗体配套提供针对免疫沉淀后Western Blot的二抗选择建议——使用抗兔IgG轻链HRP抗体并添加5%正常猪血清封闭。ARA70分子量约为70 kDa，在IP洗脱液中IgG重链（约55 kDa）可能产生干扰信号，轻链特异性二抗可有效消除这一问题，确保目标条带清晰可辨。