兔抗FBW7抗体亲和纯化，高信噪比，大幅降低单次实验成本

产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的FBW7抗体（货号A301-721A）是一款针对人源F-box/WD重复域蛋白7（FBW7）的兔多克隆抗体，经抗原亲和纯化，以未偶联完整IgG形式提供。该抗体特异性识别人源FBW7蛋白，适用于免疫沉淀及免疫组织化学检测，为SCF E3泛素连接酶复合物调控及肿瘤抑制机制研究提供可靠工具。

核心规格参数

参数 详细信息

靶标 FBW7（F-box/WD重复域蛋白7）

反应性 人类

宿主 兔

克隆性 多克隆

免疫原 第50–100位氨基酸区域

抗体形式 完整IgG

同型 IgG

偶联物 未偶联

纯度 抗原亲和纯化

抗原种属 人类

浓度 1000 ?g/ml（1 mg/ml）

缓冲液 Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮化钠

储存条件 2–8 °C

保质期 到货后1年

突出优势：该抗体浓度为1000 ?g/ml，提供了充足的工作储备，适合高通量IHC筛查及多次IP实验。

免疫原与特异性验证

A301-721A抗体采用固相载体上固定的FBW7特异性表位进行亲和纯化。该抗体识别的表位位于人FBW7蛋白的第50至100位氨基酸之间（参考编号NP_361014.1，GeneID 55294）。免疫球蛋白浓度依据比尔定律测定：1 mg/mL IgG在A280波长处的吸光度为1.4。

特异性验证要点：

免疫原区域位于蛋白N端F-box结构域邻近区域（50–100 aa），该区域在FBW7亚型中保守，但与其它F-box蛋白（如FBXW4、FBXW5）同源性较低，有助于获得特异性识别

经抗原亲和纯化，显著降低非特异性交叉反应

建议使用FBW7敲除细胞裂解液或敲低样本作为IHC/IP阴性对照

应用方法与推荐工作浓度

免疫组织化学（IHC）

推荐稀释范围：1:1,000 – 1:5,000（超宽范围，适应不同组织类型）

抗原修复条件：

对于福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片，推荐使用pH 6.0的柠檬酸盐缓冲液进行热诱导抗原修复

修复方法：微波或高压锅加热至沸腾，维持10–20分钟，自然冷却至室温

染色步骤建议：

1. 脱蜡、水化后，使用3% H?O?封闭内源性过氧化物酶（10–15分钟）

2. 热诱导抗原修复（pH 6.0柠檬酸盐缓冲液）

3. 室温冷却，正常山羊或兔血清封闭30分钟

4. 一抗4°C孵育过夜（推荐起始稀释度1:2000）

5. 匹配的HRP标记二抗室温孵育30–60分钟

6. DAB显色，苏木精复染，封片观察

组织类型参考：FBW7在多种正常组织中表达，包括睾丸、卵巢、脑、乳腺等；在多种肿瘤组织中可能出现表达下调或突变。

免疫沉淀（IP）

推荐用量：6 ?g 抗体 / mg 细胞裂解物

操作注意事项：

裂解缓冲液推荐使用非变性裂解液（如含150 mM NaCl、0.5–1% NP-40的Tris缓冲液，pH 7.4），以维持FBW7与SCF复合物（Skp1、Cullin1、Rbx1）的相互作用

必须添加蛋白酶抑制剂（PMSF、蛋白酶抑制剂混合物）保护FBW7免于降解

抗体与裂解物共孵育：4°C旋转孵育2小时至过夜

使用Protein A/G磁珠或琼脂糖珠捕获免疫复合物

洗脱后建议进行WB检测，务必使用抗兔IgG轻链特异性HRP二抗，并添加5%正常猪血清（货号S100-020）以降低背景

> 关键提示：FBW7的分子量约为70–80 kDa，与IgG重链（约55 kDa）位置不同，但仍建议使用轻链特异性二抗以获得最干净的背景，避免重链信号干扰其他共沉淀蛋白的检测。

复合物共沉淀：FBW7作为SCF E3连接酶的F-box蛋白，可识别多个底物（如Cyclin E、Notch ICD、c-Myc、c-Jun等）。通过IP-FBW7，可检测SCF核心组分（Skp1、Cullin1）的结合，或验证底物在特定条件下的泛素化依赖性降解。

免疫印迹（WB）备注

虽然主规格中Applications未直接列出WB，但产品说明中包含了免疫沉淀后WB检测的二抗方案。用户可自行验证该抗体在WB中的适用性。根据经验，FBW7多克隆抗体通常可用于WB，推荐起始稀释度为1:500–1:2000，并使用5% Milk-TBST封闭。建议使用阳性对照（如HeLa、HEK293裂解液）进行预试验。

靶点生物学背景：FBW7

FBW7（F-box/WD repeat-containing protein 7），也称为FBXW7、hCdc4或Archipelago，是F-box蛋白家族的成员之一。F-box基序最早在Cyclin F中发现，负责介导与Skp1的相互作用，从而形成SCF（Skp1-Cullin1-F-box）E3泛素连接酶复合物。

核心功能：

1. SCF E3连接酶的底物识别亚基：FBW7通过其WD40重复域识别并结合具有磷酸化降解基序的底物蛋白，将其招募至SCF复合物进行泛素化，最终被26S蛋白酶体降解。

2. 关键底物及功能：

Cyclin E：FBW7介导Cyclin E的降解，调控细胞周期G1/S转换。FBW7失活导致Cyclin E累积，引起基因组不稳定。

Notch胞内结构域（NICD）：FBW7促进NICD的降解，从而负调控Notch信号通路，抑制细胞增殖和干细胞维持。

c-Myc、c-Jun、mTOR、Mcl1：FBW7还调控多种癌蛋白和抗凋亡因子的稳定性，发挥广泛的肿瘤抑制作用。

3. 肿瘤抑制：FBW7被认为是重要的肿瘤抑制因子，在多种人类癌症（如结直肠癌、乳腺癌、卵巢癌、白血病）中频繁发生突变或表达下调。缺陷的FBW7导致其底物积累，促进肿瘤发生和发展。

分子特征：

分子量：约70–80 kDa（存在多种剪接变体）

结构域：N端F-box结构域（介导与Skp1结合）；C端WD40重复域（介导底物识别）

调控机制：FBW7本身受磷酸化、自身泛素化及转录水平调控。其肿瘤抑制功能与p53、AKT等多种信号通路交叉对话。

储存与稳定性指南

储存温度：2–8°C，请勿冷冻。反复冻融会导致蛋白聚集及活性下降。

防腐剂：0.09%叠氮化钠，可抑制微生物生长。若用于活细胞或某些功能实验，需通过透析去除。

缓冲体系：Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7–8，提供稳定的pH环境。

有效期：自到货之日起1年。建议在瓶身标注收到日期，分装成小份储存于2–8°C以降低反复开管风险。