兔抗INT11抗体亲和纯化，兼顾低丰度筛查与高表达定量

产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的INT11抗体（货号A301-274A）是一款针对人源整合子复合物亚基11（INT11）的兔多克隆抗体，经抗原亲和纯化，以未偶联完整IgG形式提供。该抗体可识别小鼠及人类样本中的INT11蛋白，适用于免疫印迹、免疫沉淀及免疫组织化学检测，为RNA聚合酶II介导的snRNA 3′端加工研究提供高效工具。

核心规格参数

参数 详细信息

靶标 INT11（整合子复合物亚基11）

反应性 小鼠、人类

宿主 兔

克隆性 多克隆

免疫原 第550位氨基酸至C端区域

抗体形式 完整IgG

同型 IgG

偶联物 未偶联

纯度 抗原亲和纯化

抗原种属 人类

浓度 1000 ?g/ml（1 mg/ml）

缓冲液 Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮化钠

储存条件 2–8 °C

保质期 到货后1年

突出优势：该抗体浓度为1000 ?g/ml，显著高于常规抗体，每微升可提供1 ?g活性抗体，适合高通量或高灵敏度实验。

免疫原与特异性验证

A301-274A抗体采用固相载体上固定的INT11特异性表位进行亲和纯化。该抗体识别的表位位于人INT11蛋白的第550至600位氨基酸之间（参考编号NP_060341.2，GeneID 54973）。免疫球蛋白浓度依据比尔定律测定：1 mg/mL IgG在A280波长处的吸光度为1.4。

特异性验证要点：

免疫原区域位于蛋白C端（550–600 aa），该区域在INT11同源物中具有保守性，支持小鼠与人样本的交叉检测

INT11属于β-内酰胺酶家族，与CPSF-73和CPSF-100具有序列相似性。抗体经抗原亲和纯化，可有效避免与家族内其他成员的交叉反应

建议使用INT11敲低或敲除细胞裂解液作为阴性对照

应用方法与推荐工作浓度

免疫印迹（WB）

推荐稀释范围：1:2,000 – 1:10,000

实验方案要点：

封闭液及抗体稀释液：含5%脱脂牛奶的TBST

一抗孵育条件：4°C孵育过夜（推荐）

细胞裂解液检测：使用山羊抗兔IgG重链+轻链抗体（货号A120-101P）作为二抗

免疫沉淀物检测：使用兔IgG轻链特异性HRP二抗，并在封闭缓冲液中添加5%正常猪血清（货号S100-020）以降低背景

> 功能性提示：由于抗体浓度高达1000 ?g/ml，即使稀释到1:10,000仍可获得0.1 ?g/ml的工作浓度。对于高表达样本（如HEK293、HeLa），可尝试更高稀释倍数以节省抗体。

免疫沉淀（IP）

推荐用量：6 ?g 抗体 / mg 细胞裂解物

操作注意事项：

裂解缓冲液推荐使用温和非变性裂解液（如含0.5% NP-40的Tris缓冲液，150 mM NaCl），以保留整合子复合物十二个亚基的天然相互作用

裂解液中必须添加蛋白酶抑制剂（PMSF、蛋白酶抑制剂混合物）

抗体与裂解物共孵育：4°C旋转孵育2小时至过夜

使用Protein A/G磁珠或琼脂糖珠捕获免疫复合物

洗脱后建议使用轻链特异性二抗进行WB检测，避免重链信号干扰

复合物共沉淀：INT11是整合子复合物的核心亚基之一，其IP产物可进一步检测其他亚基（如INTS1、INTS5、INTS9等），以验证复合物完整性。

免疫组织化学（IHC）

推荐稀释范围：1:1,000 – 1:5,000（极宽范围，覆盖低至高表达组织）

抗原修复条件：

对于福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片，推荐使用pH 6.0的柠檬酸盐缓冲液进行热诱导抗原修复

可尝试pH 9.0 Tris-EDTA，但根据产品信息，pH 6.0柠檬酸盐为首选方案

染色步骤建议：

1. 脱蜡、水合后，用3% H?O?封闭内源过氧化物酶

2. 微波或高压锅加热至沸腾，维持10–20分钟进行抗原修复

3. 室温冷却20–30分钟，正常血清封闭30分钟

4. 一抗4°C孵育过夜（推荐1:2000起始稀释）

5. HRP标记二抗及DAB显色，苏木精复染

组织表达谱：INT11在多种人类和小鼠组织中广泛表达，尤其在睾丸、脑、胸腺中水平较高。

靶点生物学背景：INT11

INT11（整合子复合物亚基11），也称为CPSF3L或RC68，是整合子复合物的12个亚基之一。该复合物在RNA聚合酶II介导的小核RNA（snRNA）3′端加工中发挥关键作用。

核心功能：

1. snRNA 3′端加工：整合子复合物负责U1和U2 snRNA的3′端形成。snRNA是剪接体的核心组分，其正确的3′端成熟对于剪接体组装和pre-mRNA剪接至关重要。INT11作为复合物的催化亚基之一，参与RNA切割反应。

2. β-内酰胺酶家族成员：INT11具有与切割和多聚腺苷酸化特异性因子CPSF-73和CPSF-100相似的序列。CPSF-73是mRNA 3′端加工的关键核酸内切酶，INT11可能在snRNA加工中发挥类似的催化功能。

3. 转录调控关联：整合子复合物与RNA聚合酶II的C端结构域（CTD）相互作用，共转录完成snRNA的成熟。INT11的功能异常可能影响snRNA水平，进而干扰全球剪接过程。

分子特征：

分子量：约68 kDa（与别名RC68中的68 kDa一致）

结构域：包含β-内酰胺酶结构域，负责核酸内切酶活性

相互作用：与整合子复合物其他亚基（INTS1-INTS10、INTS12）形成稳定的多蛋白复合物

临床关联：

INT11基因突变或表达异常与某些神经发育疾病及癌症相关，但具体机制仍在研究中。由于snRNA对神经元功能的重要作用，整合子复合物缺陷可能与神经系统疾病有关。

储存与稳定性指南

储存温度：2–8°C，请勿冷冻。反复冻融会导致蛋白聚集及活性下降。

防腐剂：0.09%叠氮化钠，可抑制微生物生长。若用于活细胞实验，需透析去除。

缓冲体系：Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7–8，提供稳定的pH环境。

有效期：自到货之日起1年。建议在瓶身标注收到日期，避免超期使用。