兔抗JMJD2B抗体，亲和纯化，助力低丰度组蛋白去甲基化酶检测

本文旨在对艾美捷Bethyl Laboratories推出的JMJD2B靶点特异性抗体（货号A301-478A）的核心技术参数、应用方法及产品特性进行系统性梳理，为相关实验设计提供直接参考。

一、产品基本特性

该抗体为兔源多克隆抗体，以全IgG形式提供，未经偶联标记。其目标靶点为JMJD2B（又称KDM4B、赖氨酸特异性去甲基化酶4B），在人和小鼠样本中具有验证活性。抗体经抗原亲和纯化处理，纯度可靠，浓度标定为1000 ?g/ml。

免疫原设计基于人JMJD2B蛋白C末端附近区域（介于第1046位氨基酸与C末端之间），具体识别表位定位在第1056至1096位氨基酸残基区间（参考序列NP_055830.1，基因ID 23030）。该区域的选择确保了抗体对天然构象蛋白的有效识别。

二、储存与缓冲体系

储存条件：2 – 8°C冷藏，切勿冷冻。  

有效期：收货之日起1年。  

缓冲液组成：Tris-枸橼酸/磷酸缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮钠作为防腐剂。  

浓度测定方法：基于比尔定律（1 mg/ml IgG在280 nm处吸光度为1.4）计算得出。

使用前需注意叠氮钠对HRP标记二抗的抑制效应，如后续涉及ELISA或WB化学发光检测，建议通过充分洗涤或使用无叠氮钠的替代缓冲体系。

三、推荐应用流程

1. 免疫沉淀

用量：每毫克细胞裂解物使用6 ?g抗体。  

操作中需保持样本低温，避免反复冻融。抗体与裂解液共孵育后可借助Protein A/G磁珠或琼脂糖珠捕获免疫复合物。

2. 蛋白质印迹

工作稀释度：1:2000 – 1:10000。  

封闭与稀释液：含5%脱脂奶粉的TBST。  

一抗孵育：建议4°C过夜，可增强低丰度靶蛋白检出能力。  

检测体系区别：

细胞裂解物直接WB：推荐使用山羊抗兔IgG（重链+轻链）HRP二抗（如A120-101P）。  

免疫沉淀后WB：为规避免疫球蛋白重链（约55 kDa）信号干扰，需使用抗兔IgG轻链HRP偶联二抗，同时在封闭液中加入5%正常猪血清（货号S100-020）以降低背景。

四、靶点生物学背景

JMJD2B是含Jumonji结构域组蛋白去甲基化酶家族成员，主要催化H3K9me3（组蛋白H3第9位赖氨酸三甲基化）的去甲基化反应。通过调控染色质状态，JMJD2B参与转录激活与抑制的平衡，在细胞周期、激素信号通路及肿瘤发生中具有重要作用。

五、别名与同源性

该抗体识别的抗原在不同数据库中可能存在以下别称：  

jmjC结构域组蛋白去甲基化蛋白3B  

JMJD2B  

Jumonji结构域包含蛋白2B  

含Tudor结构域蛋白14B（TDRD14B）  

跨物种反应性已验证为小鼠和人，其他物种需通过序列比对（表位区1056–1096）预测交叉性。

六、注意事项与质量控制

生产国家：美国  

纯化工艺：采用固相载体上固定化的JMJD2B特异性表位进行亲和纯化，确保非特异性IgG去除彻底。  

每次实验建议设置阳性对照（如已知表达JMJD2B的细胞裂解物）与阴性对照（如免疫前IgG或仅二抗处理）。  

经测试，该抗体适用于非还原条件样本制备，但若靶蛋白分子量接近50 kDa（轻链干扰区），IP-WB检测时必须使用轻链特异性二抗。