人BRG1/SMARCA4兔多克隆抗体，精准COPII囊泡运输分析工具

一、产品概述

本文介绍一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的针对人BRG1/SMARCA4的兔多克隆抗体（货号：A300-813A）。该抗体特异性识别BRG1蛋白第75–125位氨基酸之间的N端区域，经抗原亲和纯化后以完整IgG形式提供，未偶联标记物。已验证反应种属为人及小鼠，推荐应用于免疫组织化学（IHC）、免疫沉淀（IP）及免疫印迹（WB）。

BRG1（亦称为SMARCA4）是哺乳动物SWI/SNF染色质重塑复合物（BAF复合物）的核心ATP酶亚基。该复合物通过水解ATP改变核小体位置，调控基因转录。BRG1与BRCA1相互作用，参与DNA损伤修复及转录调控。BRG1基因突变与多种癌症（如非小细胞肺癌、卵巢癌、神经发育障碍相关）。可靠的特异性抗体对于研究染色质动态调控及肿瘤发生机制具有重要意义。

二、详细规格参数

参数 | 信息

靶标 | BRG1/SMARCA4

反应种属 | 小鼠、人

应用 | IHC, IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 完整IgG

免疫原 | 第75–125位氨基酸之间的区域

亚型 | IgG

偶联物 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

免疫原种属 | 人

浓度 | 200 ?g/ml

存储条件 | 2–8 °C

有效期 | 收货后1年

缓冲液 | Tris缓冲盐水，含0.1% BSA及0.09%叠氮化钠

浓度说明：本产品浓度为200 ?g/ml，不同于常规1000 ?g/ml产品。使用时需根据此浓度换算抗体体积（例如IP用6 ?g对应30 ?l）。

三、抗原表位与生产信息

该抗体识别的人BRG1/SMARCA4表位位于第75–125残基之间的N端区域，参考序列号为NP_003063.2（GeneID 6597）。免疫原对应此N端区段。

选择N端区域作为免疫原的策略具有明确优势：BRG1/SMARCA4的C端包含解旋酶结构域和ATP结合位点，相对保守；而N端75–125区段在BRG1与高度同源的BRM（SMARCA2）之间差异较大，有助于特异性识别BRG1而非BRM，减少交叉反应。

纯化工艺采用固相载体固定的表位特异性亲和层析，仅富集针对该N端表位的高亲和力IgG分子。缓冲液中含有0.1% BSA作为载体蛋白，有助于低浓度（200 ?g/ml）下抗体的稳定性，减少管壁吸附。

免疫球蛋白浓度通过比尔定律测定（1 mg/mL IgG在A280处的吸光度为1.4）。

四、应用方法与推荐条件

4.1 免疫印迹（WB）

推荐稀释比：1:2,000 至 1:10,000

通用条件：

封闭液及抗体稀释液：含5%脱脂牛奶的TBST

一抗孵育：4°C过夜

细胞裂解液WB二抗：山羊抗兔IgG（重链+轻链）HRP抗体（货号A120-101P）

免疫沉淀产物WB二抗：抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，封闭缓冲液中需添加5%正常猪血清（S100-020）

样品制备建议：

BRG1分子量约180–200 kDa（预测约180 kDa，实际因磷酸化修饰可能迁移略高）。

使用人或小鼠细胞裂解液（如HeLa、HEK293T、NIH/3T3）作为阳性对照。BRG1普遍表达，尤其在上皮细胞中丰度较高。

推荐上样量：20–40 ?g总蛋白/泳道。

裂解液需包含蛋白酶抑制剂，因BRG1可能被内源性蛋白酶降解。

凝胶与转膜：

建议使用6–8% SDS-PAGE或4–12%梯度凝胶分离BRG1（180 kDa）。

转膜使用PVDF膜（0.45 ?m孔径），湿转条件：250 mA，2.5–3小时，或4°C过夜转膜（30 V）。可添加0.01% SDS至转膜缓冲液以提升大蛋白转膜效率。

曝光：BRG1表达丰度中等，ECL曝光时间通常为1–10分钟。

4.2 免疫组织化学（IHC）

推荐稀释比：1:500 至 1:2,000

抗原修复：推荐使用柠檬酸盐缓冲液（pH 6.0） 进行热诱导表位修复（HIER）。微波加热至95–100°C，持续10–15分钟。

样本类型：福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）的人或小鼠组织切片。

检测步骤建议：

1. 脱蜡水化后，使用3%过氧化氢阻断内源性过氧化物酶。

2. 抗原修复后，以5%正常山羊血清或BSA封闭30–60分钟。

3. 一抗4°C孵育过夜（推荐1:1,000起始稀释）。

4. 使用HRP标记的二抗及DAB显色系统检测。

对照设置：

阳性对照：人正常睾丸组织（已知BRG1高表达于生精细胞）或多种肿瘤组织。

阴性对照：使用同型IgG或未免疫兔血清替代一抗；或使用BRG1敲除细胞系制作组织芯片。

4.3 免疫沉淀（IP）

推荐用量：6 ?g 抗体 / mg 蛋白裂解液

重要体积换算：本抗体浓度为200 ?g/ml，因此6 ?g对应 30 ?l 抗体体积（而非通常的6 ?l）。务必根据实际浓度计算。

操作流程如下：

1. 细胞裂解：使用非变性裂解缓冲液（如含0.5% NP-40、150 mM NaCl、50 mM Tris-HCl pH 7.4，添加蛋白酶抑制剂）。避免SDS以免破坏染色质复合物。

2. 预清除：取300–500 ?g总蛋白裂解液，与1 ?g同型兔IgG及20 ?l蛋白A/G琼脂糖珠孵育1小时。

3. 免疫沉淀：预清除上清中加入30 ?l A300-813A抗体（6 ?g），4°C旋转孵育过夜。

4. 捕获：加入30 ?l蛋白A/G珠，继续孵育2小时。

5. 洗涤：使用裂解缓冲液洗涤4次，最后一次可用高盐缓冲液（300 mM NaCl）洗涤以降低背景。

6. 洗脱：加入30 ?l 2× SDS上样缓冲液（添加DTT），煮沸5–10分钟，离心后取上清进行WB检测。

IP产物WB检测注意事项：必须使用抗兔IgG轻链HRP抗体，并添加5%正常猪血清封闭，以避免重链（55 kDa）干扰BRG1（180 kDa）的检测。由于目标条带远高于重链，实际干扰风险较低，但轻链二抗仍是最佳实践，可彻底排除重链信号。

五、储存与稳定性

未稀释抗体必须储存于2–8°C，严禁冷冻。冷冻会导致BSA和IgG的共聚集及活性丧失。在推荐条件下，自收货之日起可稳定保存1年。

缓冲液中含有0.09%叠氮化钠作为防腐剂，0.1% BSA作为稳定剂。BSA可减少抗体对管壁的非特异性吸附，尤其适合低浓度抗体（200 ?g/ml）的长期保存。若IP产物后续拟用于质谱分析，需通过脱盐柱去除叠氮化钠和BSA。分装建议：无需分装，使用原瓶并注意无菌操作即可。