兔抗PALB2抗体亲和纯化，精准检测DNA损伤修复核心蛋白

一、产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔抗PALB2抗体亲和纯化抗体，货号：A301-246A是一款以兔为宿主来源、针对人PALB2蛋白的多克隆抗体。该抗体采用抗原亲和纯化工艺制备，以完整IgG形式提供，浓度高达1000 ?g/ml（1 mg/ml），未偶联任何标记物，适用于免疫沉淀及免疫印迹实验。其高浓度设计特别适合需要大量抗体的IP及染色质免疫沉淀等应用场景。

二、靶点信息：PALB2（BRCA2伴侣与定位蛋白）

PALB2（Partner and localizer of BRCA2）是BRCA2的关键相互作用蛋白，主要功能包括：

促进BRCA2的定位与稳定性：PALB2将BRCA2锚定于DNA损伤位点，并维持其蛋白稳定性

参与DNA损伤应答：在同源重组修复中发挥核心作用，维持染色体稳定性

与FA通路相关：PALB2也称FANCN，是范可尼贫血（Fanconi anemia）通路的核心组分

临床意义：PALB2基因的双等位突变可导致范可尼贫血病；杂合突变则显著增加乳腺癌易感性。因此，PALB2是肿瘤遗传学及DNA损伤修复研究的重要靶点。

别称：FANCN、PNCA3

三、免疫原与特异性

本抗体识别的表位位于人PALB2蛋白第200至250位氨基酸残基之间（参考序列NP_078951.2，GeneID 79728）。该区域位于PALB2蛋白的N末端附近，远离与BRCA2及其他互作蛋白的结合结构域，有助于特异性检测全长PALB2而不干扰功能结构域的识别。

抗体采用固相载体上固定的表位特异性肽段进行亲和纯化，确保高特异性和低背景。

四、产品规格与储存

参数 | 详情

靶点 | PALB2

反应性 | 人

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形态 | 全IgG

亚型 | IgG

偶联物 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原种属 | 人

浓度 | 1000 ?g/ml

缓冲液 | Tris-柠檬酸-磷酸缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮钠

储存条件 | 2–8°C

有效期 | 自收货起1年

浓度测定：采用比尔定律测定免疫球蛋白浓度，其中1 mg/ml IgG在280 nm波长的吸光度为1.4。

缓冲液特点：Tris-柠檬酸-磷酸缓冲体系在pH 7–8范围内提供稳定的离子环境，有利于抗体长期保存。

五、应用与推荐稀释度

应用 | 推荐用量/稀释度 | 备注

免疫沉淀 | 6 ?g/mg 裂解物 | 每毫克总蛋白使用6 ?g抗体

免疫印迹 | 1:2000 – 1:10,000 | 推荐起始稀释度1:2000

六、免疫印迹操作要点

通用条件：

封闭液及抗体稀释液：5% Milk-TBST

一抗孵育：过夜（overnight）

细胞裂解液WB检测：

二抗推荐：山羊抗兔IgG重轻链抗体（A120-101P）

免疫沉淀产物WB检测：

二抗推荐：抗兔IgG轻链HRP偶联抗体

封闭缓冲液添加：5%正常猪血清（货号S100-020），以降低非特异性背景

七、技术要点与优化建议

1. 高浓度抗体的优势与使用策略

A301-246A的浓度达1000 ?g/ml，远高于常规抗体（通常50–200 ?g/ml）。这一特性带来以下优势：

IP实验更经济：每毫克裂解物仅需6 ?g抗体，即每微升抗体可处理约167 mg裂解物（按1000 ?g/ml计算，6 ?g对应6 ?l抗体）

储存空间高效：高浓度意味着小体积即可满足大量实验需求

灵活稀释：WB时可大幅稀释（1:10,000仍有效），减少抗体消耗

注意：初次使用时建议分装成小份（如10 ?l/管），避免反复取用导致污染或活性下降。虽然产品建议2–8°C储存且无需冷冻，但长期频繁使用时分装保存更为稳妥。

2. 目标蛋白分子量与凝胶选择

PALB2的分子量约为130–140 kDa（基于氨基酸序列）。在WB检测中：

推荐使用6-8% SDS-PAGE凝胶或4-12%梯度胶

转移条件：湿转建议300 mA恒流2-3小时，或4°C过夜（30 V）

使用PVDF膜时需用甲醇预先活化；NC膜可直接使用，但高分子量蛋白结合效率略低

3. 免疫沉淀的关键优化

抗体用量：6 ?g/mg总蛋白裂解物是经验证的标准用量。由于抗体浓度高（1 ?g/?l），每毫克裂解物仅需添加6 ?l抗体，体积影响小。

裂解液选择：PALB2参与DNA损伤修复，部分定位于染色质。推荐使用RIPA缓冲液（50 mM Tris pH 8.0, 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.5% 脱氧胆酸钠, 0.1% SDS）或含有300 mM NaCl的NP-40裂解液以有效释放染色质结合蛋白。

核酸酶处理：由于PALB2与DNA/染色质紧密相关，IP前建议用Benzonase或DNase I处理裂解物（室温15–30分钟），以减少DNA介导的非特异性结合。

交联条件：如需检测蛋白-蛋白相互作用（如PALB2-BRCA2复合物），可使用1%甲醛进行短暂交联（10分钟，室温），然后用甘氨酸淬灭，以稳定复合物。

4. 二抗选择的关键考量

在检测IP产物的WB时，常规抗兔IgG二抗会同时识别抗体的重链（~55 kDa）和轻链（~25 kDa）。PALB2分子量为130-140 kDa，远大于重链和轻链，因此重链信号不会直接干扰目标条带。然而，产品信息仍建议使用轻链特异性HRP二抗并添加5%正常猪血清，这一策略可显著降低背景，提高信噪比，尤其适用于检测低丰度PALB2的IP样本。

5. 叠氮钠的注意事项

缓冲液中含有0.09%叠氮钠作为防腐剂。如计划对抗体进行偶联标记（如生物素或HRP），需注意叠氮钠会抑制标记反应，建议使用前通过透析（使用PBS，4°C过夜）或脱盐柱去除。