兔抗CSTF64抗体亲和纯化，专为FFPE组织及肿瘤标志物研究设计

产品概述

本品为艾美捷Bethyl Laboratories推出的针对CSTF64（剪切刺激因子64 kDa亚基）的兔多克隆抗体，货号A301-092A。该抗体特异性识别人源CSTF64蛋白，适用于免疫组织化学（IHC）、免疫沉淀（IP）和蛋白质印迹（WB）检测。抗体经抗原亲和纯化，浓度为200 ?g/ml，为前体mRNA 3‘端多聚腺苷酸化机制研究提供了高特异性的检测工具。

核心规格参数

项目 | 详细信息

靶点 | CSTF64

反应性 | 人

应用 | IHC, IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

格式 | 完整IgG

免疫原 | 第375-425位氨基酸区域

亚型 | IgG

偶联物 | 非偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原物种 | 人

浓度 | 200 ?g/ml

保存条件 | 2 - 8 °C

有效期 | 收货之日起1年

缓冲液 | Tris缓冲盐溶液，含0.1% BSA和0.09%叠氮化钠

应用方法与推荐稀释度

蛋白质印迹（WB）

所有WB实验使用含5%脱脂牛奶的TBST作为封闭液及抗体稀释液。一抗孵育条件为过夜孵育。

细胞裂解液WB：使用山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（货号A120-101P）作为二抗。

免疫沉淀产物WB：使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，封闭液中需添加5%正常猪血清（货号S100-020）以降低轻链非特异性信号。

推荐稀释度：1:2000 - 1:10,000

免疫沉淀（IP）

推荐用量：6 ?g 抗体 / mg 细胞裂解液

操作要点：

1. 将6 ?g抗体与含1 mg蛋白的细胞裂解液混合

2. 4°C孵育1-2小时或过夜

3. 加入蛋白A/G琼脂糖珠，继续孵育1-2小时

4. 充分洗涤沉淀复合物（建议4-5次）

5. 使用SDS上样缓冲液洗脱，煮沸变性后进行WB检测

免疫组织化学（IHC）

推荐稀释度：1:200 - 1:1000

抗原修复：对于福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片，推荐使用柠檬酸缓冲液（pH 6.0）进行热诱导抗原修复。该步骤对于暴露CSTF64的表位、获得清晰染色信号至关重要。

染色建议：

脱蜡、水化后，在柠檬酸缓冲液中微波或高压加热修复

冷却后按常规IHC流程操作

建议同时设置阴性对照（兔IgG或未免疫血清）

产品背景信息

CstF复合物与mRNA 3‘端加工

真核生物前体mRNA的成熟需要经过5’端加帽、剪接和3‘端剪切与多聚腺苷酸化。多聚腺苷酸化是基因表达调控的关键步骤，直接影响mRNA的稳定性、核输出和翻译效率。

CSTF64是剪切刺激因子（CstF）复合物的64 kDa RNA结合亚基。CstF是多聚腺苷酸化机器的重要组成部分，负责在AAUAAA信号的下游识别富含GU（尿苷）的元件，并协同CPSF复合物完成前体mRNA的3’端剪切和多聚腺苷酸添加。

CSTF64的分子功能与相互作用

在CstF复合物中，CSTF64与以下亚基相互作用：

CSTF1（CSTF50）：50 kDa亚基，参与复合物稳定性

CSTF3（CSTF77）：77 kDa亚基，提供支架功能

CSTF64通过其RNA识别基序（RRM）特异性地结合前体mRNA 3‘非翻译区的GU丰富序列。这一识别事件是高效剪切和多聚腺苷酸化所必需的。

临床与研究意义

CSTF64的表达和功能异常与多种疾病相关：

在多种癌症（如卵巢癌、乳腺癌、胶质瘤）中，CSTF64表达失调，导致下游基因3’端加工改变、异常多聚腺苷酸化及基因表达网络重塑。

某些遗传性疾病的剪接和多聚腺苷酸化缺陷也与CSTF64的突变或表达异常有关。

高质量的特异性CSTF64抗体对于以下研究至关重要：

前体mRNA 3‘端加工机制的解析

多聚腺苷酸化调控与转录后基因表达网络的研究

免疫共沉淀结合质谱鉴定新型CstF复合物相互作用蛋白

肿瘤组织中CSTF64的定位与表达水平分析（IHC）

RNA加工相关疾病模型的蛋白表达验证

储存与稳定性注意事项

1. 保存温度：2-8°C，请勿冷冻。缓冲液中含有BSA作为稳定蛋白，可有效防止低浓度抗体（200 ?g/ml）在储存过程中的吸附损失。

2. 有效期：收货之日起1年内稳定。

3. 防腐剂：缓冲液中含有0.09%叠氮化钠，使用时应遵守实验室安全规范。

4. 分装建议：如需长期使用，可小量分装（例如20-50 ?l/管），保存于2-8°C，避免反复取用导致的污染风险。

功能性优势总结

1. 靶向内部功能区域（375-425）：该区域接近CSTF64的C端，参与与CSTF77的相互作用及RNA结合活性调节；抗体特异性识别该区域可减少与其他RNA结合蛋白的非特异性交叉反应。

2. 三重验证应用：IHC（带pH 6.0柠檬酸修复推荐）、IP（6 ?g/mg裂解液）、WB（1:2000-1:10,000）提供完整实验体系，尤其适用于多聚腺苷酸化机器中蛋白定位、互作及表达水平的多维度分析。

3. IHC优化条件明确：推荐使用柠檬酸缓冲液pH 6.0进行抗原修复，免去用户自行摸索修复条件的耗时，确保FFPE组织染色成功率。

4. 亲和纯化+BSA稳定配方：既保证了高特异性，又防止低浓度抗体在操作过程中的非特异性吸附，提高实验可重复性。

5. IP-WB一体化方案：配套抗轻链HRP二抗及猪血清封闭，有效消除沉淀中重链干扰，便于检测CSTF64与CSTF50、CSTF77的共沉淀复合物。