Synaptic System--使用单克隆重组兔抗c-Fos抗体226 008优化您的c-Fos实验

c-Fos简介

原癌基因c-fos属于即刻早期基因（immediate early genes, IEGs），在大脑中快速且短暂地表达（Herrera and Robertson, 1996）。它可被多种刺激诱导，并常被用作神经元激活的标志物（Morgan et al., 1987; Gaiddon et al., 1996; Chowdhury et al., 2000; Gallo et al., 2018; Wakhloo et al., 2020）。与许多其他即刻早期基因一样，c-Fos是一种转录因子。它与c-Jun形成异二聚体，结合到AP-1结合位点（Figure 1），并增强许多其他与增殖、分化、凋亡或炎症相关基因的表达（Ye at al., 2014）。

图1：异二聚体bZIP转录因子c-Fos/c-Jun与DNA结合示意图

c-Fos实验的关键技术参数

动物处理： 在规划动物c-Fos实验时，需注意可能影响研究的技术陷阱。例如，应考虑到c-Fos表达具有时间依赖性，易受应激影响，且在数分钟后即可被检测到（Herrera and Robertson, 1996）。重要的是，许多因素如动物处理本身（例如，针头注射）或暗期光照暴露（昼夜节律激活）均可影响c-Fos表达（Asanuma and Ogawa, 1994; Herrera and Robertson, 1996）。因此，必须精确规划和实施实验，并设置适当的对照组，以避免假阳性结果。

IHC方案： 另一个需要注意的点是免疫组织化学（IHC）方案。c-Fos阳性细胞的总数似乎具有阈值依赖性。许多参数会影响可检测到的c-Fos阳性细胞数量：组织储存条件、切片方法（冷冻切片机或振动切片机）、染色参数（例如，孵育温度）、信号增强试剂（Berghorn et al., 1994; Werner et al., 1996; Mayer and Bendayan, 2001），以及最重要的是一抗的选择。

c-Fos抗体： 一抗在特异性、灵敏度和信噪比方面存在差异，这些特性会影响实验结果。因此，我们致力于提供高特异性和一致性的c-Fos抗体，以支持科学研究和实验可重复性。由于单克隆抗体相比多克隆抗体具有多项优势，我们开发了一种新型单克隆重组兔抗c-Fos抗体。

产品链接：https://www.sysy.com/product/226008#list

单克隆重组c-Fos抗体的优势

抗体具有共同结构，由两条重链和两条轻链组成（Figure 2）。重链和轻链均包含物种特异性的恒定区和负责靶标识别的可变序列（Davies and Metzger, 1983）。

Figure 2: 抗体结构示意图。抗体由两条重链和两条轻链组成。重链和轻链均包含物种特异性的恒定区和负责靶标识别的可变序列。

在来源于确定杂交瘤细胞系的单克隆抗体制备物中，所有单个抗体分子都是相同的，并共享相同的抗原识别位点。相比之下，多克隆抗体如兔c-Fos抗体226 003则由多种抗体分子混合物组成，这些分子在其靶标识别序列上存在差异。一旦某批血清用完，必须对新的动物进行免疫。所获得的新血清含有新的c-Fos抗体混合物，具有新的特异性和亲和力特性，导致多克隆c-Fos抗体在实验性能方面出现批间差异。

我们通过单克隆重组兔c-Fos抗体226 008永久解决了批间差异的问题。我们对表现始终优异的大鼠单克隆c-Fos抗体226 017的c-Fos靶标识别结构域进行了测序，并将其与兔IgG的恒定抗体区域融合（Figure 3）。

Figure 3: 我们单克隆重组兔c-Fos抗体的构建。为制备重组兔抗c-Fos抗体226 008，我们将单克隆大鼠抗c-Fos抗体226 017的靶标识别序列与兔特异性恒定抗体区域融合。

这种高度确定的单克隆重组抗体可在受控条件下于哺乳动物细胞中表达，作为无限资源，具有极小的批间差异。它在我们测试的标准应用中表现出优异的性能，相当于甚至优于我们最佳的兔多克隆c-Fos批次（Figure 4）。虽然多克隆兔抗c-Fos抗体226 003对实验条件变化非常敏感（例如，IHC实验中的孵育温度会影响信号强度），但单克隆重组兔抗c-Fos抗体226 008在各种实验设置中均能产生稳健的染色结果，因此是您实验的最佳选择。随着时间的推移，这种单克隆抗体将用于多种不同应用，所收集的所有信息将有助于更好地表征这一研究试剂。与多克隆抗体不同，这些信息会不断积累且不会丢失，使这一研究试剂成为您手中日益宝贵和可靠的工具。

Figure 4: 单克隆重组兔抗c-Fos抗体226 008在我们所有标准应用中均表现优异。重组兔抗c-Fos抗体226 008与单克隆大鼠抗c-Fos抗体226 017及多克隆兔抗c-Fos抗体226 003在相同实验条件下进行了比较。在IHC和IHC-P实验中，c-Fos抗体用于小鼠和大鼠海马切片的间接免疫染色（图示为小鼠切片；IHC: c-Fos = 红色, DAPI = 蓝色; IHC-P: c-Fos = 棕色, 苏木精 = 蓝色）。在ICC实验中，c-Fos抗体用于大鼠海马神经元的间接免疫染色（c-Fos = 红色, MAP 2 188 011/188 002 = 绿色, DAPI = 蓝色）。在蛋白质印迹实验中，于TPA刺激的HeLa细胞核提取物中检测c-Fos（检测方法：AP染色）。

新型组织透明化技术如CLARITY和iDISCO为生物过程和结构提供了全新的研究视角。与我们的单克隆重组兔抗c-Fos抗体226 008联合使用，它们能够在大脑相对较大的区域内研究神经通路。已有研究展示了如何通过使用CLARITY改良版本结合我们的c-Fos抗体226 008标记印迹细胞，来评估同一只小鼠中重叠的细胞群（Refaeli et al. 2024）。

Figure 5: 经iDISCO光学透明化处理后，小鼠大脑矢状切面（包括皮层）的兔单克隆抗c-Fos（货号 226 008，稀释度 1:500；红色）间接免疫染色。

相关货号：

相关文献：

Asanuma and Ogawa, 1994: Pitfalls in Assessment of c-fos mRNA Expression in the Brain: Effects of Animal Handling. PMID: 7827709

Berghorn et al., 1994: cFos Immunoreactivity Is Enhanced with Biotin Amplification. PMID: 7983364

Chowdhury et al., 2000: Induction and adaptation of Fos expression in the rat brain by two types of acute restraint stress. PMID: 10822158

Davies and Metzger, 1983: Structural basis of antibody function. PMID: 6399980

Gaiddon et al., 1996: Brain-derived neurotrophic factor stimulates AP-1 and cyclic AMP-responsive element dependent transcriptional activity in central nervous system neurons PMID: 8632149

Gallo et al., 2018: Immediate Early Genes, Memory and Psychiatric Disorders: Focus on c-Fos, Egr1 and Arc. PMID: 29755331

Glover and Harrison, 1995: Crystal structure of the heterodimeric bZIP transcription factor c-Fos-c-Jun bound to DNA. PMID: 7816143

Herrera and Robertson, 1996: Activation of c-fos in the brain. PMID: 8971979

Mayer and Bendayan, 2001: Amplification methods for the immunolocalization of rare molecules in cells and tissues. PMID: 11194866

Morgan et al., 1987: Mapping Patterns of c-fos Expression in the Central Nervous System After Seizure. PMID: 3037702

Refaeli et al., 2024: Analyzing engram reactivity and long-range connectivity. PMID: 38280198

Sheng and Greenberg, 1990: The Regulation and Function of c-fos and Other Immediate Early Genes in the Nervous System. PMID: 1969743

Wakhloo et al., 2020: Functional hypoxia drives neuroplasticity and neurogenesis via brain erythropoietin. PMID: 32152318

Werner et al. 1996, Antigen retrieval, signal amplification and intensification in immunohistochemistry. PMID: 9072182

Ye et al., 2014: Small Molecule Inhibitors Targeting Activator Protein 1 (AP-1). PMID: 24831826