兔抗CPSF73抗体亲和纯化，适用于转基因模型及临床转化研究

产品概述

本品为艾美捷Bethyl Laboratories推出的针对CPSF73（剪切与多聚腺苷酸化特异性因子73 kDa亚基）的兔多克隆抗体，货号A301-091A。该抗体可识别人及小鼠来源的CPSF73蛋白，适用于免疫沉淀（IP）和蛋白质印迹（WB）检测。抗体经抗原亲和纯化，浓度为200 ?g/ml，为前体mRNA 3‘端加工及转录后调控研究提供了高特异性的检测工具。

核心规格参数

项目 | 详细信息

靶点 | CPSF73

反应性 | 小鼠、人

应用 | IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 完整IgG

免疫原 | 第634位至C末端（第684位）区域

亚型 | IgG

偶联物 | 非偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原物种 | 人

浓度 | 200 ?g/ml

保存条件 | 2 - 8 °C

有效期 | 收货之日起1年

缓冲液 | Tris缓冲盐溶液，含0.1% BSA和0.09%叠氮化钠

应用方法与推荐稀释度

蛋白质印迹（WB）

所有WB实验使用含5%脱脂牛奶的TBST作为封闭液及抗体稀释液。一抗孵育条件为过夜孵育。

细胞裂解液WB：使用山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（货号A120-101P）作为二抗。

免疫沉淀产物WB：使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，封闭液中需添加5%正常猪血清（货号S100-020）以降低轻链非特异性信号。

推荐稀释度：1:2000 - 1:10,000

免疫沉淀（IP）

推荐用量：6 ?g 抗体 / mg 细胞裂解液

操作要点：

1. 将6 ?g抗体与含1 mg蛋白的细胞裂解液混合

2. 4°C孵育1-2小时或过夜

3. 加入蛋白A/G琼脂糖珠，继续孵育1-2小时

4. 充分洗涤沉淀复合物（建议4-5次）

5. 使用SDS上样缓冲液洗脱，煮沸变性后进行WB检测

临床与研究意义

CPSF73的表达和功能异常与多种疾病相关：

在多种癌症（如胶质母细胞瘤、乳腺癌）中，CPSF73表达上调，导致下游癌基因mRNA的3’端加工效率改变。

突变或功能丧失可影响细胞增殖和分化。

高质量的特异性CPSF73抗体对于以下研究至关重要：

前体mRNA 3‘端加工机制的解析

转录后调控与基因表达网络的研究

免疫共沉淀结合质谱鉴定新型CPSF复合物相互作用蛋白

RNA加工相关疾病模型的蛋白表达分析

储存与稳定性注意事项

1. 保存温度：2-8°C，请勿冷冻。缓冲液中含有BSA作为稳定蛋白，可有效防止低浓度抗体（200 ?g/ml）在储存过程中的吸附损失。

2. 有效期：收货之日起1年内稳定。

3. 防腐剂：缓冲液中含有0.09%叠氮化钠，使用时应遵守实验室安全规范。

4. 分装建议：如需长期使用，可小量分装（例如20-50 ?l/管），保存于2-8°C，避免反复取用导致的污染风险。

功能性优势总结

1. C末端靶向表位（634-684）：该区域为CPSF73特有的C端结构域，与CPSF100相互作用及内切酶活性调控相关；抗体特异性识别该区域可减少与其他CPSF亚基的交叉反应。

2. 跨种属反应性（人/小鼠）：适用于人类细胞系及小鼠组织样本，便于利用转基因小鼠模型开展体内功能研究。

3. 宽WB稀释范围（1:2000-1:10,000）：提供实验灵活性，可根据不同样本中CPSF73的表达丰度优化信噪比。

4. 亲和纯化+BSA稳定配方：既保证了高特异性，又防止低浓度抗体在操作过程中的非特异性吸附，提高实验可重复性。

5. IP-WB一体化方案：配套抗轻链HRP二抗及猪血清封闭，有效消除沉淀中重链干扰，便于检测CPSF73与CPSF100、CPSF160或其他加工因子的共沉淀。

应用场景举例

应用场景 | 推荐实验方案

检测不同细胞系或组织中CPSF73蛋白表达水平 | WB，1:5000稀释，检测30-50 ?g总蛋白

验证siRNA敲低CPSF73后的沉默效率 | WB，1:4000稀释，配合内参（GAPDH或β-actin）

内源性CPSF73与CPSF复合物其他亚基（如CPSF100、CPSF160）的相互作用 | IP（6 ?g/mg裂解液），产物WB检测互作蛋白

HeLa细胞核提取物中CPSF73的亚细胞定位（结合细胞分级分离） | WB，1:3000稀释，分别检测胞质、核质、染色质结合组分

组蛋白mRNA加工研究（如siRNA处理后改变3’端加工效率） | IP产物中检测组蛋白mRNA的3‘端剪切中间体（需结合RNA检测方法）