兔抗KIF20A/RAB6KIFL抗体亲和纯化，助力有丝分裂与胞质分裂研究设计方案

产品概述

本品为艾美捷Bethyl Laboratories推出的针对KIF20A（又称RAB6KIFL、MKLP2）的兔多克隆抗体，货号A300-879A。该抗体特异性识别人源KIF20A蛋白，适用于免疫沉淀（IP）和蛋白质印迹（WB）检测。抗体经抗原亲和纯化，浓度为1000 ?g/ml，为有丝分裂调控及高尔基体运输研究提供了高特异性的检测工具。

核心规格参数

项目 | 详细信息

靶点 | KIF20A / RAB6KIFL

反应性 | 人

应用 | IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 完整IgG

免疫原 | 第840位至C末端（第890位）区域

亚型 | IgG

偶联物 | 非偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原物种 | 人

浓度 | 1000 ?g/ml

保存条件 | 2 - 8 °C

有效期 | 收货之日起1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮化钠

应用方法与推荐稀释度

蛋白质印迹（WB）

所有WB实验使用含5%脱脂牛奶的TBST作为封闭液及抗体稀释液。一抗孵育条件为过夜孵育。

细胞裂解液WB：使用山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（货号A120-101P）作为二抗。

免疫沉淀产物WB：使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，封闭液中需添加5%正常猪血清（货号S100-020）以降低轻链非特异性信号。

推荐稀释度：1:2000 - 1:10,000

免疫沉淀（IP）

推荐用量：6 ?g 抗体 / mg 细胞裂解液

操作要点：

1. 将6 ?g抗体与含1 mg蛋白的细胞裂解液混合

2. 4°C孵育1-2小时或过夜

3. 加入蛋白A/G琼脂糖珠，继续孵育1-2小时

4. 充分洗涤沉淀复合物（建议4-5次）

5. 使用SDS上样缓冲液洗脱，煮沸变性后进行WB检测

产品背景信息

驱动蛋白超家族概述

驱动蛋白超家族包含超过40种KIF马达蛋白，其主要功能是沿微管进行细胞内运输。驱动蛋白活性与多种细胞功能密切相关，包括：

囊泡运输

有丝分裂纺锤体形成

染色体分离

染色体排列（congression）

胞质分裂

结构上，所有驱动蛋白均含有一个马达结构域，该结构域具有微管结合位点和核苷酸结合位点，利用ATP水解产生的能量将货物沿微管定向运输。

KIF20A/RAB6KIFL的功能

KIF20A（又称RAB6KIFL、MKLP2）在细胞内发挥双重功能：

1. 高尔基体内运输：通过与Rab6小GTP酶相互作用，参与高尔基体内的囊泡运输。这一功能对于维持高尔基体的结构和分泌途径的正常运作至关重要。

2. 有丝分裂与胞质分裂：在有丝分裂后期，KIF20A定位于纺锤体；在末期，其定位于卵裂沟（cleavage furrow）和中体（midbody）。研究表明，KIF20A在胞质分裂过程中发挥关键作用，参与中央纺锤体形成和收缩环的组装。

临床研究价值

KIF20A在多种人类癌症中呈现过表达，包括胰腺癌、肝癌、乳腺癌和肺癌，其高表达通常与不良预后相关。因此，KIF20A被认为是潜在的肿瘤标志物和抗有丝分裂药物靶点。高特异性的KIF20A抗体对于以下研究至关重要：

有丝分裂和胞质分裂的分子机制解析

高尔基体运输与细胞周期调控的交叉对话研究

肿瘤组织中KIF20A表达水平的定量检测

抗有丝分裂药物（如紫杉醇）作用机制及耐药性研究

储存与稳定性注意事项

1. 保存温度：2-8°C，请勿冷冻。反复冻融会导致抗体变性及活性损失。

2. 有效期：收货之日起1年内稳定。

3. 防腐剂：缓冲液中含有0.09%叠氮化钠，使用时应遵守实验室安全规范。

4. 分装建议：由于抗体浓度为1000 ?g/ml，可根据实验频率分装成小份（如20-50 ?l/管），仍保存于2-8°C，避免反复取用导致的污染风险。

功能性优势总结

1. 超高浓度（1000 ?g/ml）：提供充足的抗体总量，适合大规模或长期系列实验；高浓度有利于IP实验中高效捕获低丰度或有丝分裂期特异性表达的KIF20A。

2. C末端靶向表位（840-890）：该区域为KIF20A特有的C端尾部，与Rab6结合及货物识别相关；抗体特异性识别该区域可避免与驱动蛋白家族其他成员（如KIF23、KIF14）的交叉反应。

3. 宽WB稀释范围（1:2000-1:10,000）：提供极大实验灵活性，可根据不同细胞系或细胞周期阶段KIF20A的表达水平优化信噪比。

4. 亲和纯化+高纯度：抗原亲和纯化确保抗体特异性，降低WB背景和IP非特异性沉淀。

5. IP-WB一体化方案：配套抗轻链HRP二抗及猪血清封闭建议，有效消除沉淀中重链干扰，便于检测KIF20A与Rab6或其他中体蛋白的共沉淀。