兔抗DHX9抗体亲和纯化，助力转录共激活、RNA代谢及BRCA1互作研究

本抗体为艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源多克隆抗体（货号：A300-855A），特异性识别DHX9（DEAH盒解旋酶9）蛋白的C末端区域（第1220位至C末端）。经抗原亲和纯化，提供完整IgG分子形式，未偶联任何标记物（Unconjugated），浓度为200 ?g/mL。适用于免疫组织化学（IHC）、免疫沉淀（IP）和蛋白质印迹（WB），反应种属为人。

产品规格与理化参数

参数项目 详细规格

目标抗原 DHX9（DEAH盒解旋酶9，又称RNA解旋酶A）

反应种属 人

宿主来源 兔

克隆类型 多克隆

抗体形式 完整IgG

免疫原 第1220位至C末端（第1270位）之间的区域

亚型 IgG

偶联物 无

纯度 抗原亲和纯化

抗原物种 人

浓度 200 ?g/mL

保存条件 2–8 °C

有效期限 自收货起1年

缓冲体系 Tris缓冲盐水，含0.1% BSA和0.09%叠氮化钠

浓度测定依据：采用比尔定律（Beer’s Law），标准为1 mg/mL IgG在280 nm波长处的吸光值（A280）为1.4。

抗原背景：DHX9/RNA解旋酶A的结构与功能

DHX9（DExH-box helicase 9），又称RNA解旋酶A（RHA）、核DNA解旋酶II（NDH II），是DEAH盒蛋白家族成员之一。该家族蛋白含有一个高度保守的DEAH（Asp-Glu-Ala-His）氨基酸序列基序，主要功能为ATP依赖的RNA解旋酶。

核心功能：

RNA代谢的多面手：参与前体mRNA剪接、RNA合成、RNA降解、RNA输出、RNA翻译、RNA二级结构形成、核糖体生物发生及RNP复合物组装

转录共激活：作为CREB结合蛋白（CBP）和RNA聚合酶II之间的桥梁，共激活CBP依赖性转录；与BRCA1相互作用，参与DNA损伤应答

逆转录病毒RNA核输出：促进逆转录病毒RNA的核质转运

RNA编辑与snRNP组装：参与RNA编辑和小核核糖核蛋白颗粒的组装

结构特征：

N端：含有两个dsRNA结合结构域（dsRBD），识别双链RNA

中央：DEAH解旋酶核心结构域，包含ATP酶活性和RNA解旋活性

C端：含有核定位信号（NLS）和蛋白-蛋白相互作用区域（本抗体识别区域，1220–1270位）

本抗体的靶向优势：识别C末端区域（1220–1270），可检测内源性全长DHX9（分子量约140–150 kDa），且不影响抗体与解旋酶结构域的结合，适用于IP-MS、ChIP等下游功能研究。

别名：RHA、DDX9、NDH II、NDH2、NDHII、核DNA解旋酶II、白锁蛋白（LKP）。

生产与纯化流程

1. 免疫原设计：选择人DHX9蛋白C末端第1220–1270位之间的合成肽段（该区域在DEAH家族中具有相对特异性）

2. 免疫方案：免疫兔，诱导产生多克隆抗血清

3. 亲和纯化：将表位特异性肽段固定在固相支持物上，从抗血清中亲和捕获特异性抗体，去除与其他DEAH家族成员的非特异性交叉反应

4. 浓度标定：A280法，1 mg/mL对应吸光值1.4

5. 缓冲体系：Tris缓冲盐水（TBS）含0.1% BSA作为稳定蛋白，0.09%叠氮化钠作为防腐剂

注：本品浓度较低（200 ?g/mL），但经亲和纯化后特异性高，推荐稀释倍数在WB中可达1:2,000–1:10,000，IHC中可达1:100–1:500，IP中需按体积计算用量（30 ?L/mg裂解液）。

适用范围与推荐使用条件

> 重要说明：本抗体经验证适用于IHC、IP和WB。所有WB实验采用统一封闭和稀释条件（5%牛奶-TBST，一抗过夜）。IHC推荐进行抗原修复。

应用技术 推荐使用条件 备注

免疫组织化学（IHC） 1:100 – 1:500 FFPE切片需用柠檬酸缓冲液（pH 6.0）进行抗原修复

免疫沉淀（IP） 6 ?g抗体/毫克裂解液 按总蛋白质量计算抗体用量

蛋白质印迹（WB） 1:2,000 – 1:10,000 推荐起始稀释度1:5,000

浓度换算：本品浓度为200 ?g/mL，即0.2 ?g/?L。进行IP时，如需6 ?g抗体/毫克裂解液，则需加入30 ?L抗体原液/毫克裂解液。

储存与稳定性

储存条件：

温度：2–8°C（严禁冷冻）

防腐剂：0.09%叠氮化钠

稳定蛋白：0.1% BSA防止低浓度抗体吸附损失

分装建议：本品浓度较低，建议避免频繁开盖，可分装为50 ?L/管，仍储存于2–8°C

有效期：自收货起12个月。

操作优化与常见问题排查

问题现象 可能原因 解决方案

WB无信号或信号弱 上样量不足；一抗稀释度过高 增加上样量至40–50 ?g；降低一抗稀释度至1:2,000

WB出现高分子量弥散带 蛋白聚集或降解 新鲜制备裂解液，煮沸时间延长至10分钟

IHC无染色 抗原修复不充分；一抗稀释度过高 确保柠檬酸缓冲液pH 6.0并加热至沸腾；提高一抗浓度至1:100

IHC背景高 封闭不足；二抗交叉反应 延长封闭时间至1小时；使用5%正常血清封闭；增加洗涤次数

IP下拉效率低 抗体用量不足（200 ?g/mL需加体积较大） 增加抗体至10 ?g/mg（50 ?L/mg）；确保裂解液中无SDS

IP-WB出现55 kDa强条带（如检测互作蛋白） 重链干扰 改用抗兔轻链HRP二抗+5%正常猪血清

阳性对照细胞系：

HeLa、293T、HepG2等常见细胞系均高表达DHX9，无需特殊处理

产品优势总结

特性 功能优势

C末端特异性（1220–1270） 识别DHX9独特C端区域，避免与DEAH家族其他成员交叉反应

亲和纯化 低背景高信噪比，适用于IP-MS和ChIP等高级应用

三重应用验证（IHC/IP/WB） 同一抗体覆盖蛋白表达、定位和互作分析，实验连贯性强

低浓度高效价 200 ?g/mL仍支持WB达1:10,000，IHC达1:500，经济效益高

含BSA稳定剂 防止稀释抗体在储存期吸附损耗

IHC经验证方案 提供柠檬酸pH 6.0抗原修复条件，节省优化时间