兔抗c-Maf抗体亲和纯化，适用于Th2分化、晶状体发育及多发性骨髓瘤研究

本抗体为艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源多克隆抗体（货号：A300-613A），特异性识别小鼠c-Maf转录因子的第150–200位氨基酸区域。经抗原亲和纯化，提供完整IgG分子形式，未偶联任何标记物（Unconjugated），浓度为1000 ?g/mL（1 mg/mL）。适用于Western blot（WB）检测，反应种属为小鼠。

产品规格与理化参数

参数项目 详细规格

目标抗原 c-Maf（v-maf肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物）

反应种属 小鼠

宿主来源 兔

克隆类型 多克隆

抗体形式 完整IgG

免疫原 第150–200位氨基酸之间的区域

亚型 IgG

偶联物 无

纯度 抗原亲和纯化

抗原物种 小鼠

浓度 1000 ?g/mL（1 mg/mL）

保存条件 2–8 °C

有效期限 自收货起1年

缓冲体系 Tris-枸橼酸-磷酸盐缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮化钠

浓度测定依据：采用比尔定律（Beer’s Law），标准为1 mg/mL IgG在280 nm波长处的吸光值（A280）为1.4。

抗原背景：c-Maf转录因子的结构与功能

c-Maf是Maf转录因子家族的成员之一，该家族蛋白均含有一个高度保守的碱性区域和亮氨酸拉链结构域（bZIP），介导DNA结合和蛋白-蛋白相互作用。c-Maf在组织特异性基因调控和细胞分化中发挥重要作用。

核心功能：

免疫调节：在T细胞中，c-Maf是白细胞介素-4（IL-4）和白细胞介素-10（IL-10）的转录激活因子，参与Th2细胞分化

发育调控：参与晶状体纤维细胞分化，对眼晶状体的正常发育至关重要

癌基因潜能：c-Maf易位已在人多发性骨髓瘤中被发现，可能具有致癌活性

结构特征：

N端转录激活域（含本抗体识别的150–200区段）

C端bZIP域（碱性区+亮氨酸拉链），介导二聚化及与DNA的MARE位点结合

本抗体的靶向优势：识别第150–200位氨基酸区域，位于激活域中段，可检测内源性全长c-Maf蛋白（分子量约45–50 kDa，不同剪接变体略有差异），且能区分c-Maf与其他Maf家族成员。

别名：c-Maf、c-Maf长形式、原癌基因c-Maf、2810401A20Rik、A230108G15Rik、AW047063等。

适用范围与推荐使用条件

> 重要说明：本抗体经测试仅确认用于Western blot（WB）应用。其他应用（如IP、IHC、ICC）尚未由生产实验室验证，但可能有效，用户需自行优化。

应用技术 推荐使用条件 备注

蛋白质印迹（WB） 1:1,000 – 1:10,000 推荐起始稀释度1:2,000–1:5,000

注：本品仅保证小鼠样本的反应性。对于其他种属（如人、大鼠），建议进行预实验验证。

标准WB流程（细胞裂解液或组织匀浆）

样本制备：

使用含蛋白酶抑制剂（PMSF、亮肽素、抑肽酶）的RIPA或NP-40裂解液提取总蛋白

c-Maf为核转录因子，建议使用核蛋白提取试剂盒或高盐裂解液（如含0.4 M NaCl的缓冲液）富集核组分，以提高检测灵敏度

蛋白浓度定量后，加入SDS上样缓冲液（含DTT或β-巯基乙醇），95°C煮沸5–10分钟

凝胶电泳：

c-Maf分子量约45–50 kDa（小鼠c-Maf长形式约48 kDa）

推荐使用10% SDS-PAGE分离胶，可清晰分离c-Maf条带

上样量：细胞裂解液建议30–50 ?g总蛋白/泳道；核蛋白提取物建议10–20 ?g/泳道

转膜：

PVDF膜（需甲醇活化）或硝酸纤维素膜

湿转条件：恒流250–300 mA，90–120分钟（冰浴）；或半干转条件：15–20 V，30–45分钟

转膜后可用丽春红染色确认转膜效率和蛋白上样量

封闭（生产实验室参数）：

封闭液：5% 脱脂牛奶-TBST（TBS含0.05–0.1% Tween-20）

封闭条件：室温摇床孵育1小时

一抗孵育（生产实验室参数）：

稀释液：5% 脱脂牛奶-TBST（与封闭液一致）

稀释度：1:1,000 – 1:10,000（推荐起始1:2,000–1:5,000）

孵育条件：4°C过夜（或室温摇床2小时）

注意：过夜孵育可显著增强低丰度c-Maf的检测信号

洗涤：

TBST洗涤3次，每次10分钟

二抗孵育：

二抗：山羊抗兔IgG（重链+轻链）HRP偶联抗体，货号 A120-101P（或其他等效产品）

稀释度：按厂商推荐（通常1:5,000–1:20,000），使用5%牛奶-TBST稀释

孵育条件：室温摇床1小时

洗涤：TBST洗涤3–5次，每次10分钟

检测：

化学发光法（ECL），使用X光胶片或化学发光成像仪显影

c-Maf表达水平在多数细胞系中较低，可能需要延长曝光时间（1–10分钟）

阳性对照与样本选择

推荐的阳性对照样本：

小鼠脾脏组织裂解液：T细胞中c-Maf表达较高，脾脏富含T细胞

小鼠Th2细胞：在体外分化的小鼠Th2细胞中，c-Maf被强烈诱导表达

小鼠晶状体组织：晶状体纤维细胞高表达c-Maf

某些小鼠骨髓瘤细胞系：如NS-1、P3X63Ag8等可能表达c-Maf（需验证）

推荐的刺激条件：

初始CD4+ T细胞在抗CD3/CD28刺激下，加入IL-4可诱导c-Maf表达（24–48小时）

阴性对照：

使用兔同型对照IgG替代一抗

使用已知不表达c-Maf的细胞系（如未活化的初始CD4+ T细胞）

储存与稳定性

储存条件：

温度：2–8°C（严禁冷冻，冷冻会导致抗体蛋白变性及活性丧失）

防腐剂：0.09%叠氮化钠，有效抑制细菌生长

分装建议：本品浓度为1 mg/mL，体积适中。如需避免反复取用污染，可无菌分装为10–20 ?L/管，仍储存于2–8°C（不建议-20°C）

有效期：自收货之日起12个月。超过有效期后使用，建议重新验证效价（如通过WB检测阳性对照样本）。