兔抗MED1亲和纯化抗体--覆盖PPAR/甲状腺激素/维生素D受体信号通路研究

一、产品基本规格

项目 | 规格

靶标 | MED1（介质复合物亚基1）

验证反应种属 | 小鼠、人

适用应用 | IHC（免疫组织化学）、IP（免疫沉淀）、WB（蛋白质印迹）

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

抗体形式 | 完整IgG

免疫原 | 人MED1蛋白第1531位至C末端区域

同种型 | IgG

标记类型 | 未偶联（Unconjugated）

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原种属来源 | 人

工作浓度 | 1000 ug/ml

储存条件 | 2 - 8 °C

有效期 | 自收货之日起1年

缓冲体系 | Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7~8，含0.09%叠氮化钠

二、产品制备与质量控制

本抗体由艾美捷代理Bethyl推出，货号：A300-793A，采用抗原亲和纯化工艺制备，具体流程与质控参数如下：

亲和纯化：使用固相载体上固定的MED1特异性表位肽段进行亲和层析，确保高特异性识别MED1蛋白。

表位定位：识别表位对应于人介质复合物亚基1（MED1）第1525位至C末端（第1581位）之间的区域，参考序列编号NP_004765.2（GeneID 5469）。

浓度测定：免疫球蛋白浓度通过比尔定律（Beer's Law）确定，以1 mg/mL IgG在A280波长下吸光度为1.4作为换算基准。

三、靶标生物学信息

MED1是介质复合物（Mediator complex）的核心组分之一。介质复合物作为转录共激活因子，参与几乎所有RNA聚合酶Ⅱ依赖性基因的调控转录过程。其核心功能包括：

信号传导桥梁：介质复合物充当基因特异性调控蛋白与基础RNA聚合酶Ⅱ转录装置之间的信息传递桥梁；

启动子募集：通过与调控蛋白直接相互作用，介质复合物被招募至启动子区域；

预起始复合物组装：作为支架蛋白，介质复合物促进RNA聚合酶Ⅱ及通用转录因子组装为功能性的预起始复合物（preinitiation complex）。

MED1通过其C末端区域与多种核受体（包括甲状腺激素受体、过氧化物酶体增殖物激活受体PPAR、维生素D受体等）直接相互作用，在激素信号转导、代谢调控及发育过程中发挥关键作用。

四、推荐实验条件与操作要点

以下为各应用场景的推荐稀释比例及关键操作参数，供实验设计参考。

1. 免疫组织化学（IHC）

推荐稀释比：1:1,000 ~ 1:5,000

抗原修复：推荐使用pH 6.0柠檬酸盐缓冲液进行热诱导抗原修复（HIER），适用于福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织切片。

适用范围：组织切片中MED1蛋白的原位检测，适用于介质复合物在组织水平表达分布及病理学评估。

2. 免疫沉淀（IP）

推荐用量：6 ?g抗体/毫克蛋白裂解液

适用范围：细胞裂解液中MED1蛋白的富集，适用于介质复合物组分共沉淀分析或下游WB检测。

操作建议：建议使用Protein A琼脂糖珠进行免疫复合物捕获；沉淀前建议进行预清除（Pre-clearing）步骤以降低非特异性结合。

3. 蛋白质印迹（WB）

推荐稀释比：1:2,000 ~ 1:10,000

封闭与稀释液：5% Milk-TBST（含Tween-20的TBS缓冲液）

一抗孵育：推荐4°C孵育过夜（O/N），以确保低丰度信号的有效检测。

二抗选择：

-细胞裂解液WB：推荐使用山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（如A120-101P）进行信号放大。

-免疫沉淀物WB：推荐使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，并在封闭缓冲液中添加5%正常猪血清（Cat. No. S100-020），以有效降低重链交叉反应的干扰。

适用范围：细胞裂解液或IP富集产物中MED1蛋白表达水平及迁移行为的分析。MED1预测分子量约为158 kDa，实际电泳迁移可能存在差异。

4. 通用操作注意事项

样本制备：推荐使用含蛋白酶抑制剂的RIPA或NP-40裂解液制备细胞裂解物，以保持MED1蛋白完整性。核蛋白提取可提高转录相关因子的检测效率。

阳性对照：推荐使用HeLa、293T等表达MED1水平较高的细胞系裂解液作为阳性对照。

叠氮化物注意事项：缓冲液含0.09%叠氮化钠作为防腐剂，若后续IP洗脱或WB检测体系涉及HRP偶联二抗，需注意叠氮化物对HRP活性的抑制作用。

五、储存与稳定性

储存条件：2 ~ 8°C冷藏保存，严禁冷冻。

有效期：自收货之日起1年内保持稳定。

分装建议：如需长期使用，建议按单次用量分装后储存于2 ~ 8°C，避免反复取用导致污染或活性下降。

六、应用场景建议

本抗体适用于以下研究领域：

转录调控机制研究：MED1作为介质复合物的核心亚基，适用于RNA聚合酶Ⅱ依赖性基因转录的调控机制探索；

核受体信号转导分析：MED1与甲状腺激素受体、PPAR、维生素D受体等互作，适用于激素信号通路及代谢调控研究；

蛋白质互作网络分析：结合IP-WB技术，可用于MED1与介质复合物其他组分（如MED14、MED17等）的共沉淀验证；

组织病理学评估：通过IHC检测MED1在不同组织及肿瘤样本中的表达水平及定位。