兔抗RbBP5亲和纯化抗体--覆盖组蛋白甲基化、染色质重塑、肿瘤抑制三条研究主线

一、产品基本规格

项目 | 规格

靶标| RbBP5（视网膜母细胞瘤结合蛋白5）

验证反应种属| 小鼠、人

适用应用| ChIP、ChIP-chip、ChIP-Seq、ICC、IHC、IP、WB

宿主| 兔

克隆性| 多克隆

抗体形式| 完整IgG

免疫原| 人RbBP5蛋白第488位至C末端区域

同种型| IgG

标记类型| 未偶联（Unconjugated）

纯度| 抗原亲和纯化

抗原种属来源| 人

工作浓度| 1000 ug/ml

储存条件| 2 - 8 °C

有效期| 自收货之日起1年

缓冲体系| Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7~8，含0.09%叠氮化钠

二、产品制备与质量控制

本抗体由艾美捷代理Bethyl推出，货号：A300-109A，采用抗原亲和纯化工艺制备，具体流程与质控参数如下：

亲和纯化：使用固相载体上固定的RbBP5特异性表位肽段进行亲和层析，确保高特异性识别RbBP5蛋白。

表位定位：识别表位对应于人RbBP5（retinoblastoma binding protein 5）第500位至C末端（第538位）之间的区域，参考序列编号NP_005048.2（GeneID 5929）。

浓度测定：免疫球蛋白浓度通过比尔定律（Beer's Law）确定，以1 mg/mL IgG在A280波长下吸光度为1.4作为换算基准。

三、靶标生物学信息

RbBP5（视网膜母细胞瘤结合蛋白5）是人源Set1样组蛋白甲基转移酶（HMT）复合物的核心亚基之一。该复合物负责组蛋白H3第4位赖氨酸（H3K4）的单甲基化、二甲基化和三甲基化修饰，是表观遗传调控网络中的关键节点。

RbBP5参与组装多种Set1样复合物，这些复合物包含不同的组分组合，涵盖以下蛋白成员：MLL、MLL2、MLL3、MLL4、ASH2L、WDR5、hDPY-30、hSwd2、CXXC1、HCF1、Menin、PTIP、PA1、NCOA6及UTX。通过这些多样化的复合物，RbBP5在基因转录激活、发育调控及细胞命运决定中发挥广泛作用。此外，RbBP5也是众多能与视网膜母细胞瘤肿瘤抑制蛋白（pRb）结合的蛋白之一，提示其在细胞周期调控与肿瘤抑制通路中亦具有潜在功能。

四、推荐实验条件与操作要点

以下为各应用场景的推荐稀释比例及关键操作参数，供实验设计参考。

1. 染色质免疫沉淀（ChIP）及衍生应用

ChIP：推荐用量1 ~ 3 ?g/反应，参考文献Dou等（Nat Struct Mol Biol, 2006）。该抗体的既往批次已在ChIP应用中验证有效。

ChIP-chip：推荐用量10 ?g/反应。

ChIP-Seq：推荐用量2 ?g/反应。

适用范围：适用于组蛋白H3K4甲基转移酶复合物在基因组范围的靶标定位分析，以及特定基因启动子区域RbBP5占位研究。

2. 免疫细胞化学（ICC）

推荐稀释比：1:250 ~ 1:1,000

适用范围：培养细胞中RbBP5蛋白的原位定位与表达分析。

3. 免疫组织化学（IHC）

推荐稀释比：1:500 ~ 1:2,000

抗原修复：推荐使用pH 6.0柠檬酸盐缓冲液进行热诱导抗原修复（HIER），适用于福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织切片。

适用范围：组织切片中RbBP5表达水平的原位检测。

4. 免疫沉淀（IP）

推荐用量：6 ?g抗体/毫克蛋白裂解液

适用范围：细胞裂解液中RbBP5蛋白的富集，适用于蛋白质互作分析或下游WB检测。

操作建议：建议使用Protein A琼脂糖珠进行免疫复合物捕获；沉淀前建议进行预清除（Pre-clearing）步骤以降低非特异性结合。

5. 蛋白质印迹（WB）

推荐稀释比：1:10,000 ~ 1:25,000

封闭与稀释液：5% Milk-TBST

一抗孵育：推荐4°C孵育过夜。

二抗选择：

-细胞裂解液WB：推荐使用山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（如A120-101P）。

-免疫沉淀物WB：推荐使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，并在封闭缓冲液中添加5%正常猪血清（Cat. No. S100-020），以有效降低重链交叉反应的干扰。

6. 通用操作注意事项

阳性对照：推荐使用HeLa、293T等表达RbBP5水平较高的细胞系裂解液作为WB阳性对照；ChIP实验建议使用已知RbBP5靶基因位点作为阳性对照。

叠氮化物注意事项：缓冲液含0.09%叠氮化钠，若后续IP洗脱或WB检测涉及HRP体系，需注意叠氮化物对HRP活性的抑制。

五、储存与稳定性

储存条件：2 ~ 8°C冷藏保存，严禁冷冻。

有效期：自收货之日起1年内保持稳定。

分装建议：如需长期使用，建议按单次用量分装后储存于2 ~ 8°C，避免反复取用。