兔抗Nanog亲和纯化抗体--低背景高特异性，适用于核蛋白检测

一、产品基本规格

项目 | 规格

靶标| Nanog

验证反应种属| 小鼠

适用应用| IP（免疫沉淀）、WB（蛋白质印迹）

宿主| 兔

克隆性| 多克隆

抗体形式| 完整IgG

免疫原| 小鼠Nanog同源盒第1至50位氨基酸区域

同种型| IgG

标记类型| 未偶联（Unconjugated）

纯度| 抗原亲和纯化

抗原种属来源| 小鼠

工作浓度| 1000 ug/ml

储存条件| 2 - 8 °C

有效期| 自收货之日起1年

缓冲体系| Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7~8，含0.09%叠氮化钠

二、产品制备与质量控制

本抗体由艾美捷代理Bethyl推出，货号：A300-397A，采用抗原亲和纯化工艺制备，具体流程与质控参数如下：

亲和纯化：使用固相载体上固定的Nanog特异性表位肽段进行亲和层析，确保高特异性识别Nanog蛋白。

表位定位：识别表位对应小鼠Nanog同源盒（homeobox）第1至50位氨基酸之间的区域，参考TrEMBL条目Q80Z64（GeneID 71950）。

浓度测定：免疫球蛋白浓度通过比尔定律（Beer's Law）确定，以1 mg/mL IgG在A280波长下吸光度为1.4作为换算基准。

三、靶标生物学信息

Nanog是一种同源盒转录因子，在胚胎干细胞（ESC）自我更新维持及分化延迟中发挥核心调控作用。Nanog通过调控下游靶基因的表达，协同Oct4、Sox2等多能性相关因子，共同维持干细胞的多能性状态。在早期胚胎发育过程中，Nanog的动态表达对于内细胞团（ICM）的形成及原始外胚层的建立至关重要。

四、推荐实验条件与操作要点

以下为各应用场景的推荐稀释比例及关键操作参数，供实验设计参考。

1. 免疫沉淀（IP）

推荐用量：6 ?g抗体/毫克蛋白裂解液

适用范围：细胞裂解液中Nanog蛋白的富集，适用于蛋白质互作分析或下游WB检测。

操作建议：建议使用Protein A或Protein G琼脂糖珠进行免疫复合物捕获；沉淀前建议进行预清除（Pre-clearing）步骤以降低非特异性结合。

2. 蛋白质印迹（WB）

推荐稀释比：1:2,000 ~ 1:10,000

封闭与稀释液：5% Milk-TBST（含Tween-20的TBS缓冲液）

一抗孵育：推荐4°C孵育过夜（O/N），以确保低丰度信号的有效检测。

二抗选择：

-细胞裂解液WB：推荐使用山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（如A120-101P）进行信号放大。

-免疫沉淀物WB：推荐使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，并在封闭缓冲液中添加5%正常猪血清（Cat. No. S100-020），以有效降低重链交叉反应的干扰。

适用范围：细胞裂解液或IP富集产物中Nanog蛋白表达水平的定量及迁移行为分析。

3. 通用操作注意事项

样本制备：推荐使用含蛋白酶抑制剂的RIPA或NP-40裂解液制备细胞裂解物，以保持Nanog蛋白完整性。胚胎干细胞样本建议使用核蛋白提取试剂盒以获得更富集的靶蛋白。

阳性对照：推荐使用小鼠胚胎干细胞（如E14、R1细胞系）裂解液作为阳性对照，分化后的细胞或成体组织裂解液可作为阴性对照。

叠氮化物注意事项：缓冲液含0.09%叠氮化钠作为防腐剂，若后续IP洗脱或WB检测体系涉及HRP偶联二抗，需注意叠氮化物对HRP活性的抑制作用。

五、储存与稳定性

储存条件：2 ~ 8°C冷藏保存，严禁冷冻。

有效期：自收货之日起1年内保持稳定。

分装建议：如需长期使用，建议按单次用量分装后储存于2 ~ 8°C，避免反复取用导致污染或活性下降。