兔抗Menin亲和纯化抗体--覆盖MEN1综合征研究、蛋白互作网络与组蛋白甲基化分析

一、产品基本规格

项目 | 规格

靶标| Menin

验证反应种属| 小鼠、人

适用应用| IHC（免疫组织化学）、IP（免疫沉淀）、WB（蛋白质印迹）

宿主| 兔

克隆性| 多克隆

抗体形式| 完整IgG

免疫原| 人Menin蛋白第560位至C末端区域

同种型| IgG

标记类型| 未偶联（Unconjugated）

纯度| 抗原亲和纯化

抗原种属来源| 人

工作浓度| 1000 ?g/ml

储存条件| 2 - 8 °C

有效期| 自收货之日起1年

缓冲体系| Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7~8，含0.09%叠氮化钠

二、产品制备与质量控制

本抗体由艾美捷代理Bethyl推出，货号：A300-105A，采用抗原亲和纯化工艺制备，具体流程与质控参数如下：

亲和纯化：使用固相载体上固定的Menin特异性表位肽段进行亲和层析，确保高特异性识别Menin蛋白。

表位定位：识别表位对应于人Menin蛋白第575位至C末端（第615位）之间的区域，参考序列编号NP_000235.2（GeneID 4221）。

浓度测定：免疫球蛋白浓度通过比尔定律（Beer's Law）确定，以1 mg/mL IgG在A280波长下吸光度为1.4作为换算基准。

三、靶标生物学信息

Menin是由MEN1基因编码的蛋白质产物，该基因是Ⅰ型多发性内分泌腺瘤病（MEN1）相关的候选肿瘤抑制因子。Menin在DNA合成调控或DNA损伤应答中可能发挥重要功能。研究表明，Menin与多种蛋白质相互作用，参与多条关键信号通路：

转录调控：与JunD（AP-1异二聚体成员）结合并抑制其转录活性；

蛋白互作网络：与Pem、FANCD2、RPA、NMMHCII-A、GFAP、vimentin、Hsp70、NF-κB蛋白、Smads、mSin3A等相互作用；

表观遗传调控：作为MLL2和MLL1 Set1样组蛋白H3K4甲基转移酶复合物的核心组分，直接与ASH2、Rbbp5和WDR5结合。通过该复合物，Menin调控HOX基因和CDK抑制基因的组蛋白甲基化水平，从而介导其肿瘤抑制活性。

四、推荐实验条件与操作要点

以下为各应用场景的推荐稀释比例及关键操作参数，供实验设计参考。

1. 免疫组织化学（IHC）

推荐稀释比：1:500 ~ 1:2,000

抗原修复：推荐使用pH 6.0柠檬酸盐缓冲液进行热诱导抗原修复（HIER），适用于福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织切片。

适用范围：组织切片中Menin蛋白的原位检测，适用于MEN1相关肿瘤组织学评估及Menin表达分布分析。

2. 免疫沉淀（IP）

推荐用量：6 ?g抗体/毫克蛋白裂解液

适用范围：细胞裂解液中Menin蛋白的富集，适用于蛋白质互作分析或下游WB检测。

操作建议：建议使用Protein A或Protein G琼脂糖珠进行免疫复合物捕获；沉淀前建议进行预清除（Pre-clearing）步骤以降低非特异性结合。

3. 蛋白质印迹（WB）

推荐稀释比：1:10,000 ~ 1:25,000

封闭与稀释液：5% Milk-TBST（含Tween-20的TBS缓冲液）

一抗孵育：推荐4°C孵育过夜（O/N），以确保低丰度信号的有效检测。

二抗选择：

-细胞裂解液WB：推荐使用山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（如A120-101P）进行信号放大。

-免疫沉淀物WB：推荐使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，并在封闭缓冲液中添加5%正常猪血清（Cat. No. S100-020），以降低重链交叉反应干扰。

适用范围：细胞裂解液或IP富集产物中Menin蛋白表达水平及迁移行为的分析。

4. 通用操作注意事项

样本制备：推荐使用含蛋白酶抑制剂的RIPA或NP-40裂解液制备细胞裂解物，以保持Menin蛋白完整性。

阳性对照：推荐使用表达Menin水平较高的细胞系（如HeLa、293T细胞）裂解液作为阳性对照。

叠氮化物注意事项：缓冲液含0.09%叠氮化钠作为防腐剂，若后续IP洗脱或WB检测体系涉及HRP偶联二抗，建议在IP洗脱或样本制备时注意叠氮化物的干扰（叠氮化物会抑制HRP活性）。

五、储存与稳定性

储存条件：2 ~ 8°C冷藏保存，严禁冷冻。

有效期：自收货之日起1年内保持稳定。

分装建议：如需长期使用，建议按单次用量分装后储存于2 ~ 8°C，避免反复取用导致污染或活性下降。

六、应用场景建议

本抗体适用于以下研究领域：

肿瘤抑制机制研究：Menin作为MEN1综合征相关肿瘤抑制因子，可用于探索其在内分泌肿瘤发生中的功能；

表观遗传调控研究：Menin作为MLL组蛋白甲基转移酶复合物的核心组分，适用于组蛋白修饰及基因表达调控研究；

蛋白质互作网络分析：结合IP-WB技术，可用于Menin与JunD、Smads、ASH2等多种互作蛋白的共沉淀验证；

组织病理学评估：通过IHC检测Menin在不同组织及肿瘤样本中的表达水平及定位。